Patologisk proteinuri er et af de vigtigste og permanente tegn på nyrer og urinveje sygdomme. Bestemmelsen af ​​urinproteinkoncentration er et vigtigt og vigtigt element i urintestning. Identifikation og kvantitativ vurdering af proteinuri er vigtig, ikke kun ved diagnosticering af mange primære og sekundære nyresygdomme, men vurderingen af ​​ændringer i proteinuriens sværhedsgrad i dynamikken giver information om den patologiske processes forløb og om effektiviteten af ​​behandlingen. Detektion af protein i urinen, selv i spormængder, bør være alarmerende for mulig nyresygdom eller urinveje og kræver genanalyse. Af særlig opmærksomhed er meningsløshed ved urinforskning og især bestemmelse af urinprotein uden at overholde alle regler for dets indsamling.

Alle metoder til bestemmelse af protein i urinen kan opdeles i:

• kvalitet,
• semikvantitative,
• Kvantitativ.

Kvalitative metoder

Alle urinproteinprøver af høj kvalitet er baseret på proteinernes evne til at denaturere under påvirkning af forskellige fysiske og kemiske faktorer. I nærvær af protein i urinprøven er der enten turbiditet eller tab af flokkulerende sediment.

Betingelser for bestemmelse af protein i urinen baseret på koagulationsreaktionen:

1. Urin skal være sur. Den alkaliske urin surgøres med flere (2-3) dråber eddikesyre (5-10%).
2. Urin skal være tydelig. Uklarhed elimineres gennem et papirfilter. Hvis uklarheden ikke forsvinder, tilsættes talkum eller brændt magnesia (ca. 1 tsk per 100 ml urin), ryst og filtrer.
3. Kvalitativ test skal udføres i to rør, en af ​​dem - kontrollen.
4. Søg efter uklarhed skal være på en sort baggrund i transmitteret lys.

De kvalitative metoder til bestemmelse af protein i urinen omfatter:

Som det fremgår af talrige undersøgelser, gør ingen af ​​de mange kendte metoder til kvalitativ bestemmelse af protein i urinen det muligt at opnå pålidelige og reproducerbare resultater. På trods af dette, i de fleste CDL i Rusland, anvendes disse metoder i vid udstrækning som screening - i urinen med et positivt kvalitativt svar udføres proteinkvantificering yderligere. Af de kvalitative reaktioner anvendes en Geller-test og en prøve med sulfosalicylsyre mere almindeligt, men en prøve med sulfosalicylsyre anses for det meste for at detektere patologisk proteinuri. Kogeprøven anvendes i øjeblikket praktisk taget ikke på grund af dens arbejdsomhed og varighed.

Semikvantitative metoder

Brandberg-Roberts-Stolnikov-metoden er baseret på Geller-ringtesten, så de samme fejl overholdes med denne metode som med Geller-testen.

I øjeblikket anvendes diagnostiske strimler i stigende grad til at bestemme urinprotein. Til den semikvantitative bestemmelse af protein i urin på en strimmel er det mest anvendte farvestof bromphenolblåt i citratbuffer. Proteinindholdet i urinen bedømmes af intensiteten af ​​den blågrønne farve, som udvikler sig efter kontakt af reaktionszonen med urin. Resultatet vurderes visuelt eller ved brug af urinanalysatorer. På trods af den store popularitet og åbenlyse fordele ved tørkemiske metoder (enkelhed, analysehastighed) er disse metoder til urinalyse generelt og proteinbestemmelse i særdeleshed ikke uden alvorlige fejl. En af dem, der fører til forvrængning af diagnostisk information, er den større følsomhed af bromphenolblå indikator for albumin i sammenligning med andre proteiner. I denne henseende er teststrimlerne primært tilpasset til påvisning af selektiv glomerulær proteuri, når næsten alt urinprotein er repræsenteret af albumin. Med udviklingen af ​​ændringer og overgangen af ​​selektiv glomerulær proteinuri til ikke-selektiv (forekomsten af ​​globuliner i urinen) undervurderes resultaterne af bestemmelsen af ​​protein i forhold til de sande værdier. Denne kendsgerning gør det umuligt at anvende denne metode til bestemmelse af protein i urinen for at vurdere tilstanden af ​​nyrerne (glomerulært filter) over tid. I rørformet proteinuri undersøges resultaterne af proteinbestemmelse også. Bestemmelse af protein ved hjælp af diagnostiske strimler er ikke en pålidelig indikator for lave proteinurier (de fleste af de disponible diagnostiske strimler har ikke evnen til at fange protein i urinen i en koncentration lavere end 0,15 g / l). Negative resultater af proteinbestemmelse på striber udelukker ikke tilstedeværelsen i urinen af ​​globuliner, hæmoglobin, uromucoid, Bens-Jones protein og andre paraproteiner.

Flager af slim med et højt indhold af glycoproteiner (for eksempel i inflammatoriske processer i urinvejen, pyuria, bakteriuri) kan slå sig på strimmelens indikatorzone og føre til falske positive resultater. Falske positive resultater kan også være forbundet med en høj koncentration af urinstof. Dårlig belysning og dårlig farveopfattelse kan medføre unøjagtige resultater.

I denne henseende bør brugen af ​​diagnostiske strimler begrænses til screeningsprocedurer, og de opnåede resultater med deres hjælp bør kun betragtes som vejledende.

Kvantitative metoder

Den korrekte kvantitative bestemmelse af protein i urinen er i nogle tilfælde ikke en nem opgave. Vanskelighederne ved dens løsning bestemmes af følgende antal faktorer:

• lavt proteinindhold i en sund persons urin, ofte på tærsklen af ​​følsomhed ved de mest kendte metoder;
• Tilstedeværelsen i urinen af ​​mange forbindelser, som kan blande sig i løbet af kemiske reaktioner;
• betydelige udsving i indholdet og sammensætningen af ​​urinproteiner i forskellige sygdomme, der gør det vanskeligt at vælge et passende kalibreringsmateriale.

I kliniske laboratorier anvendes de såkaldte "rutinemæssige" metoder til bestemmelse af protein i urinen overvejende, men de giver ikke altid tilfredsstillende resultater.

Ud fra et specialanalytikeres synspunkt, der arbejder i laboratoriet, skal metoden beregnet til kvantitativ bestemmelse af urinprotein opfylde følgende krav:

• have et lineært forhold mellem absorptionen af ​​komplekset dannet under den kemiske reaktion og proteinindholdet i prøven i et bredt spektrum af koncentrationer og således undgå yderligere operationer ved fremstilling af prøven til undersøgelsen;
• bør være enkel, ikke kræve den højtuddannede performer, udføres med et lille antal operationer;
• har høj følsomhed, analytisk pålidelighed, når man bruger små mængder af det studerede materiale
• være modstandsdygtig over for forskellige faktorer (variationer i prøvesammensætning, tilstedeværelse af lægemidler osv.);
• have en acceptabel pris
• være let at tilpasse til automatiske analysatorer;
• Resultatet af bestemmelsen bør ikke afhænge af proteinsammensætningen af ​​urinprøven.

Ingen af ​​de kendte metoder til kvantitativ bestemmelse af protein i urinen kan fuldt ud hævde at være "guldstandarden".

Kvantitative metoder til bestemmelse af protein i urinen kan opdeles i turbidimetrisk og kolorimetrisk.

Turbidimetriske metoder

Turbidimetriske metoder indbefatter:

• bestemmelse af protein med sulfosalicylsyre (SSC),
• bestemmelse af protein med trichloreddikesyre (THC),
• Proteinbestemmelse med benzethoniumchlorid.

Turbidimetriske metoder er baseret på at reducere opløseligheden af ​​urinproteiner på grund af dannelsen af ​​en suspension af suspenderede partikler under indflydelse af udfældningsmidler. Proteinindholdet i testprøven bedømmes enten ved intensiteten af ​​lysfordeling, bestemt ved antallet af lysdisperterende partikler (nephelometrisk analysemetode) eller ved dæmpning af lysstrømmen ved den resulterende suspension (turbidimetrisk analysemetode).

Størrelsen af ​​lysspredning i udfældningsmetoder til detektering af protein i urinen afhænger af mange faktorer: blandingshastigheden for reagenserne, reaktionsblandingens temperatur, mediumets pH, tilstedeværelsen af ​​fremmede forbindelser, fotometrifunktioner. Omhyggelig overholdelse af reaktionsbetingelserne bidrager til dannelsen af ​​en stabil suspension med en konstant partikelstørrelse og opnåelse af relativt reproducerbare resultater.

Nogle lægemidler påvirker resultaterne af turbidimetriske metoder til bestemmelse af protein i urinen, hvilket fører til de såkaldte "falsk-positive" eller "falsk-negative" resultater. Disse omfatter nogle antibiotika (benzylpenicillin, cloxacillin, osv.), Radioaktive iodholdige stoffer, sulfa-lægemidler.

Turbidimetriske metoder er dårligt standardiserede, hvilket ofte fører til fejlagtige resultater, men på trods heraf bliver de nu meget udbredt i laboratorier på grund af lave omkostninger og tilgængelighed af reagenser. Den mest anvendte metode i Rusland er bestemmelsen af ​​protein med sulfosalicylsyre.

Colorimetriske metoder

De mest følsomme og præcise er kolorimetriske metoder til bestemmelse af urinprotein, baseret på specifikke farveproteinreaktioner.

Disse omfatter:

1. biuret reaktion,
2. Lowry metode
3. metoder baseret på forskellige farvestoffers evne til at danne komplekser med proteiner:
   • Ponceau S (Ponceau S),
   • Coomassie Brilliant Blue Coomassie Brilliant Blue
   • Pyrogallol rød.

Ud fra kunstnerens synsvinkel er biuretmetoden i det daglige arbejde i laboratoriet med en stor forskningsstrøm ubelejligt på grund af det store antal operationer. Samtidig er metoden præget af høj analytisk pålidelighed, gør det muligt at bestemme protein i en bred vifte af koncentrationer og detektere albumin, globuliner og paraproteiner med tilsvarende følsomhed, hvilket medfører, at biuretmetoden betragtes som en reference og anbefales til sammenligning af andre analytiske metoder til påvisning af protein i urinen. Biuretmetoden til bestemmelse af protein i urinen udføres fortrinsvis i laboratorier, der betjener nefrologiske afdelinger, og anvendes i tilfælde, hvor resultaterne af bestemmelsen ved anvendelse af andre metoder er tvivlsomme såvel som at bestemme mængden af ​​dagligt proteinab i nephrologiske patienter.

Lowry-metoden, som har en højere følsomhed end biuretmetoden, kombinerer biuretreaktionen og Folin-reaktionen med aminosyrerne tyrosin og tryptophan i proteinmolekylet. På trods af den høje følsomhed giver denne metode ikke altid pålidelige resultater, når proteinindholdet bestemmes i urinen. Årsagen til dette er den ikke-specifikke interaktion af Folins reagens med ikke-proteinkomponenter i urin (oftest aminosyrer, urinsyre, kulhydrater). Adskillelsen af ​​disse og andre urinkomponenter ved dialyse eller proteinudfældning tillader en at med succes anvende denne metode til kvantitativ bestemmelse af urinprotein. Nogle stoffer - salicylater, chlorpromazin, tetracycliner kan påvirke denne metode og fordreje resultaterne af undersøgelsen.

Tilstrækkelig følsomhed, god reproducerbarhed og nem bestemmelse af protein ved bindende farvestoffer gør disse metoder lovende, men de høje omkostninger ved reagenser forhindrer deres bredere anvendelse i laboratorier. På nuværende tidspunkt bliver pyrogallol-rødmetoden mere almindelig i Rusland.

Når man undersøger proteinuriens niveau, skal man huske på, at forskellige metoder til bestemmelse af proteinuri har forskellig følsomhed og specificitet for adskillige urinproteiner.

Baseret på de empiriske data anbefales det at bestemme proteinet ved to forskellige metoder og beregne den sande værdi ved hjælp af en af ​​følgende formler:

proteinuri = 0,4799 B + 0,5230 L;
proteinuri = 1,5484 B - 0,4825 S;
proteinuri = 0,2167 S + 0,7579 L;
proteinuri = 1,0748 P - 0,0986 B;
proteinuri = 1,0104 P - 0,0289 S;
proteinuri = 0,8959 P + 0,0845 L;

hvor:
B - måleresultat med Coomassie G-250;
L er måleresultatet med Lowrys reagens;
P - måleresultat med pyrogallolmolybdat
S er måleresultatet med sulfosalicylsyre.

I betragtning af de markante udsving i niveauet af proteinuri på forskellige tidspunkter af dagen, samt afhængigheden af ​​proteinkoncentrationen i urinen fra diurese, forskellige af dens indhold i de enkelte urinprøver øjeblikket i patologien af ​​renal taget for at vurdere sværhedsgraden af ​​proteinuria i en daglig tab af protein i urinen, dvs. at bestemme den såkaldte daglig proteinuri. Det udtrykkes i g / dag.

Hvis det er umuligt at indsamle daglig urin, anbefales det at bestemme koncentrationen af ​​protein og kreatinin i en enkelt del af urinen. Da hastigheden af ​​kreatininfrigivelse i løbet af dagen er ret konstant og ikke afhænger af ændringer i urineringshastigheden, er forholdet mellem proteinkoncentration og kreatininkoncentration konstant. Dette forhold korrelerer godt med den daglige udskillelse af protein og kan derfor bruges til at vurdere proteinuriens sværhedsgrad. Normalt protein / kreatininforhold bør være mindre end 0,2. Protein og kreatinin måles i g / l. En vigtig fordel ved metoden til vurdering af proteinuriens sværhedsgrad ved forholdet mellem protein-kreatinin er fuldstændig eliminering af fejl forbundet med manglende eller ufuldstændig opsamling af daglig urin.

Referencer:

• OV Novoselov, MB Pyatigorsk, Yu E. Mikhailov, "Kliniske aspekter af identifikation og vurdering af proteinuri," Manuel hoved CDL, nummer 1, Januar 2007
• A. V. Kozlov, "Proteinuri: metoder til dets påvisning", foredrag, St. Petersburg, SPbMAPO, 2000
• VL Emanuel, "Laboratoriediagnose af nyresygdom. Urinsyndrom ", - Håndbog af leder af KDL, nr. 12, december 2006
• VI Pupkova, L.M. Prasolov - Bestemmelse af protein i urin og cerebrospinalvæske. Koltsovo, 2007
• Håndbog af kliniske laboratorieforskningsmetoder. Ed. E. A. Kost. Moskva, "Medicine", 1975

Relaterede artikler

Kvantitative metoder til bestemmelse af totalt urinprotein

Enhver urinprøve er egnet til proteinkvantificering. De fleste forskere foretrækker at bestemme mængden af ​​protein i urinen opsamlet dagligt for at fastslå det daglige tab af protein.

Sektion: Urinanalyse

Halvkvantitative metoder til bestemmelse af totalt protein i urinen

I øjeblikket anvendes diagnostiske strimler i stigende grad til at bestemme urinprotein. Til den semikvantitative bestemmelse af protein i urin på en strimmel er det mest anvendte farvestof bromphenolblåt i citratbuffer. Proteinindholdet i urinen bedømmes af intensiteten af ​​den blågrønne farve, som udvikler sig efter kontakt af reaktionszonen med urin.

Sektion: Urinanalyse

Kvalitative metoder til bestemmelse af totalt protein i urinen

Alle urinproteinprøver af høj kvalitet er baseret på proteinernes evne til at denaturere under påvirkning af forskellige fysiske og kemiske faktorer. I nærvær af protein i urinprøven er der enten turbiditet eller tab af flokkulerende sediment.

Sektion: Urinanalyse

Bestemmelse af urinprotein i prøve med 20% sulfosalicylsyre

Prøven med 20% sulfosalicylsyre henviser til de kvalitative reaktioner til bestemmelse af protein i urinen. Da den er baseret på koagulationsreaktionen, skal den testede urin opfylde visse krav: at være transparent og have en sur reaktion.

Sektion: Urinanalyse

Geller ring test

Geller-ringtesten er en kvalitativ reaktion til bestemmelse af urinprotein. Da den er baseret på koagulationsreaktionen, skal den testede urin opfylde visse krav: at være transparent og have en sur reaktion.

Sektion: Urinanalyse

Metoder til bestemmelse af protein i urinen

En lille mængde protein i den daglige urin findes også hos helt sunde individer, men sådanne små koncentrationer opdages ikke i enkelte portioner ved brug af de anvendte metoder. Ca. 70% af urinproteinerne hos en sund person tegner sig for uromucoid, et protein der er et produkt af nyretævet; Derfor er andelen af ​​glomerulært protein i urinen hos raske mennesker ubetydelig, og proteinuri er normalt 50-150 mg / dag, hvor de fleste urinproteiner er identiske med valle.

Det accepteres at skelne mellem følgende former for proteinuri afhængigt af oprindelsesstedet: prerenal, der er forbundet med forøget vævsprotein nedbrydning, alvorlig hæmolyse; renal, på grund af nyrernes patologi, som kan opdeles i glomerulær og rørformet; postrenal, der er forbundet med urinvejens patologi og oftest forårsaget af inflammatorisk udstødning.

Afhængig af varigheden af ​​eksistensen af ​​isolerede konstant proteinuri, eksisterende i mange uger og endda år, og forbigående, som udkommer med jævne mellemrum, nogle gange endda i fraværet af nyresygdom, såsom feber og alvorlig forgiftning. Det er tilrådeligt at skelne mellem variabiliteten af ​​proteinuri: med daglig tab af protein op til 1 g - moderat, fra 1 til 3 g - medium og mere end 3 g - udtalt.

Detektion i urinen af ​​proteiner med en relativ stor molekylvægt indikerer fraværet af selektivitet af nyrfilteret og dets udtalte skade. I disse tilfælde skal du tale om den lave selektivitet af proteinuri. Derfor er definitionen af ​​urinproteinfraktioner på nuværende tidspunkt blevet udbredt. De mest præcise metoder er elektroforese i stivelse og polyacrylamidgeler.
Ifølge resultater opnået ved disse metoder kan man bedømme selektiviteten af ​​proteinuri.

De fleste kvalitative og kvantitative metoder til bestemmelse af protein i urinen er baseret på dens koagulation i urinvolumen eller ved grænsefladen mellem medier (urin og syre); hvis der er en måde at måle intensiteten af ​​koagulation på, bliver prøven kvantitativ.

Unified sulfosalicylic acid assay:

Påkrævet reagens:

20% sulfosalicylsyreopløsning.

Forløbet af studiet:

I 2 reagensglas hældes 3 ml filtreret urin. I reagensrøret tilsættes 6-8 dråber reagens. På en mørk baggrund sammenligner kontrolrøret med en erfaren. Turbiditet i testrøret indikerer tilstedeværelsen af ​​protein, prøven anses for positiv.

Hvis urinens reaktion er alkalisk, syres der før 2-3 minutter med 2-3 dråber af en 10% vandig opløsning af eddikesyre.

Brandberg-Roberts-Stolnikov Unified Method:

Metoden er baseret på Geller-ringprøven, som består i, at der ved grænsen for salpetersyre og urin, i nærvær af protein, forekommer koagulering, og der vises en hvid ring.

Påkrævet reagens:

30% opløsning af salpetersyre (relativ densitet 1,2) eller reagens Larionic.
Fremstilling af reagens Larion: 20-30 g natriumchlorid opløses ved opvarmning i 100 ml destilleret vand, afkøles, filtreres. Til 99 ml af filtratet hældes 1 ml koncentreret salpetersyre.

Forløbet af studiet:

1-2 ml salpetersyre (eller larionsyrereagens) hældes i røret og forsigtigt over den rørformede væg forsynes den samme mængde filtreret urin. Udseendet af en tynd hvid ring ved grænsefladen mellem to væsker mellem 2. og 3. minut indikerer tilstedeværelsen af ​​protein i en koncentration på ca. 0,033 g / l. Hvis ringen vises tidligere end 2 minutter efter lagningen, skal urinen fortyndes med vand og genplacering af allerede fortyndet urin. Graden af ​​fortynding af urin udvælges afhængigt af typen af ​​ring, dvs. dens bredde, kompaktitet og udseendestidspunktet. Med en trådlignende ring, som optrådte tidligere 2 minutter, bliver urinen fortyndet 2 gange, med en bred en - 4 gange, med en kompakt en - 8 gange osv. Proteinkoncentrationen beregnes ved at gange 0,033 ved fortyndingshastigheden og udtrykkes i gram pr. 1 liter (g / l).

Nogle gange opnås en hvid ring, når der er store mængder urater. I modsætning til proteinringen er uratet lidt højere end grænsen mellem to væsker og opløses, når den opvarmes lidt.

Kvantitativ bestemmelse af protein i urinen ved turbiditet dannet ved tilsætning af sulfosalicylsyre:

Metodeprincippet:

Intensiteten af ​​turbiditet under proteinkoagulering med sulfosalicylsyre er proportional med dens koncentration.

Påkrævede reagenser:

1. 3% sulfosalicylsyreopløsning.

2. 0,9% natriumchloridopløsning.

3. Standard albuminopløsning - 1% opløsning (1 ml af en opløsning indeholdende 10 mg albumin) 1 g lyofiliseret albumin (fra bovint eller humant serum) blev opløst i en lille mængde 0,9% natriumchloridopløsning i kolben med 100 ml og derefter justeret til mærket med den samme opløsning. Reagenset stabiliseres ved tilsætning af 1 ml 5% natriumazidopløsning (NaN3). Ved opbevaring i køleskabet er reagenset gyldigt i 2 måneder.

Specielt udstyr - fotoelektrisk farveimeter.

Forløbet af studiet:

1,25 ml filtreret urin indføres i et reagensglas, der er fremstillet op til 5 ml med 3% sulfosalicylsyreopløsning og blandet. Efter 5 minutter måles de på et fotoelektrisk kolorimeter ved en bølgelængde på 590-650 nm (orange eller rødt lysfilter) mod en kontrol i en celle med en optisk sti længde på 5 mm. Kontrol er et rør, hvor 1,25 ml filtreret urin blev tilsat op til 5 ml 0,9% natriumchloridopløsning. Beregningen udføres i henhold til kalibreringsplanen, for hvilken konstruktionen af ​​hvilke fortyndinger fremstilles ud fra standardopløsningen som angivet i tabellen.

Fra hver resulterende opløsning tages 1,25 ml og behandles som eksperimentelle prøver.

Rektilinær afhængighed ved opbygning af kalibreringsgraf er lagret op til 1 g / l. Ved højere koncentrationer skal prøven fortyndes og tage hensyn til fortyndingen i beregningen.

Falske positive resultater kan opnås, hvis der er kontrastmidler i urinen indeholdende organisk iod. Derfor kan testen ikke anvendes til personer, der tager iodpræparater; Et falsk positivt resultat kan også skyldes sulfanilamidpræparater, store doser penicillin og ved høje koncentrationer i urinsyre af urinsyre.

Biuret metode:

Metodeprincippet:

Peptidbindingerne af proteinet med kobbersalte i alkalisk C danner et kompleks af lilla farve. Proteiner præfældes med trichloreddikesyre.

Påkrævede reagenser:

1. 10% opløsning af trichloreddikesyre.
2. 20% kobberopløsning (CuSO4 ∙ 5H2O).
3. 3% NaOH-opløsning.

Forløbet af studiet:

Til 5 ml urin taget fra den daglige mængde, tilsættes 3 ml trikloreddikesyre, centrifugeret til et konstant volumen af ​​sediment. Supernatanten suges af med en pipette, bundfaldet opløses derefter i 5 ml NaOH-opløsning. 0,25 ml CuSO4 tilsættes til opløsningen, blandingen omrøres og centrifugeres. Supernatanten fotograferes ved en bølgelængde på 540 nm i en kuvette med en optisk sti længde på 10 mm imod destilleret vand. Koncentrationen af ​​proteinet beregnes ud fra kalibreringskurven, mens man plotterer den, er koncentrationen af ​​proteinet (g / l) plottet på y-aksen og den optiske densitet i udryddelsesenheder på abscissaaksen. Baseret på den opnåede koncentration beregnes det daglige tab af protein i urinen.

Brug af indikatorpapir (strimler):

Protein kan detekteres ved hjælp af indikatorpapir (strimler), der fremstilles af "Albuphan", "Ames" (England), "Albustix", "Boehringer" (Tyskland), "Comburtest" osv.

Princippet er baseret på fænomenet af den såkaldte proteinfejl for nogle syre-baseindikatorer. Indikatordelen af ​​papiret er mættet med tetrabromphenolblåt og citratbuffer. Når papiret er fugtet, opløses bufferen og giver den passende pH for indikatorreaktionen.

Ved 3,0-3,5 reagerer aminogrupper af proteiner med indikatoren og ændrer sin oprindelige gule farve til en grønlig blå, hvorefter man sammenligner med farveskalaen det er muligt at estimere proteinkoncentrationen i urinen groft. Hovedforudsætningen for korrekt drift af indikatorstrimler er at tilvejebringe en pH i intervallet 3,0-3,5 for reaktionen at forekomme.

Hvis papiret er i kontakt med urinen under undersøgelse længere end den i instruktionerne angivne eksponering, opløses citratbufferen i den, og derefter reagerer indikatoren på den egentlige pH i urinen, dvs. giver en falsk positiv reaktion. På grund af det faktum, at bufferkapaciteten er begrænset, opnås falske positive resultater, selvom retningslinjerne følges i prøver af for alkalisk urin (pH> 6,5), og i urin med urin med lavt indhold af urin (pH 6,5) med lav relativ tæthed urin og ved en lav koncentration af bensonprotein.

Påkrævede reagenser:

2 M acetatbuffer pH 4,9.

Forløbet af studiet:

Den filtrerede urin i mængden 4 ml blandes med 1 ml buffer og opvarmes i 15 minutter i et vandbad ved en temperatur på 56 ° C. I nærvær af Bens-Jones proteiner vises et markant bundfald inden for 2 minutter, og hvis Bens-Jones proteinkoncentrationen er mindre end 3 g / l, kan prøven være negativ. I praksis er dette yderst sjældent, da koncentrationen af ​​Bens-Jones-protein i urinen for størstedelens vedkommende er signifikant.

Med fuldstændig sikkerhed kan Bens-Jones-proteinet detekteres ved et immunoelektroforetisk studie ved anvendelse af specifik sera mod immunoglobulins tunge og lette kæder.

Bestemmelse af albumose (proteose):

Albumoser er produkter af proteinspaltning, hvis princip er baseret på det faktum, at de ikke foldes, når de koges, men giver en positiv biuretreaktion og saltes ud med nogle salte, især ammoniumsulfat og zinkacetat i et surt medium.

Normal urin indeholder ikke albumose. Spor kan være i normal urin i tilfælde af urenhed af sæd. I patologi kan albumose forekomme i urinen under febrile tilstande, blod- og plasmatransfusioner, resorption af ekssudater og transudater og desintegration af tumorer.

Påkrævede reagenser:

1. Mættet natriumchloridopløsning.
2. Koncentreret natriumhydroxidopløsning.
3. En svag opløsning af kobbersulfat (næsten farveløs).

Forløbet af studiet:

En mættet opløsning af natriumchlorid (1/3 volumen) tilsættes til urin surgjort med eddikesyre, koges, og den varme væske filtreres. Albumoser passerer ind i filtratet, hvor deres tilstedeværelse bestemmes ved en biuretreaktion. Til filtratet tilsættes 1/2 volumen af ​​en koncentreret opløsning af kaustisk sodavand og et par dråber af en svag opløsning af kobbersulfat. Med en positiv prøve opnås en rødviolet farve.

Ved en positiv test med sulfosalicylsyre opvarmes urinen. Hvis uklarheden forsvinder og dukker op igen, når den afkøles, betyder det, at urinen indeholder albumoser eller proteinlegemet af Bens-Jones.

Protein i urinen, laboratorieprøver

Metoder til bestemmelse af urinprotein

For klinikken er både kvalitativ og kvantitativ bestemmelse af protein i urinen.

Kvalitative test til bestemmelse af urinprotein
Foreslog mere end 100 reaktioner til kvalitativ bestemmelse af protein i urinen. De fleste af dem er baseret på proteinfældning ved fysiske (opvarmning) eller kemiske midler. Tilstedeværelsen af ​​protein er bevist ved forekomsten af ​​turbiditet.

Også af interesse er kolorimetriske tørprøver.

Nedenfor beskrives kun det vigtigste for udøvelsen af ​​prøven.

Sulfosalicylsyreanalyse. Til et par milliliter urin tilsættes 2-4 dråber af en 20% opløsning af sulfosalicylsyre. Når en positiv reaktion fremstår turbiditet. Resultatet er betegnet med termerne: opalescens, en svagt positiv, positiv eller stærk positiv reaktion. Sulfosalicylsyre-testen er en af ​​de mest følsomme prøver til dannelse af protein i urinen. Hun finder selv de mindste unormale stigninger i urinprotein. Takket være en simpel teknik har denne test fundet bred anvendelse.

Test med aseptol. Aseptol er en erstatning for sulfosalicylsyre. Det kan fremstilles ud fra materialer, der er tilgængelige i ethvert laboratorium (phenol og svovlsyre). Som reagens anvendes en 20% aseptolopløsning. Prøven udføres som følger: I et reagensglas indeholdende 2-3 ml urin tilsættes 0,5-1-1 ml aseptolopløsning til bunden. Hvis en hvid ring af koaguleret protein viser sig ved grænsen mellem to væsker, er prøven positiv.

Gellers test. Under et par milliliter urin saltes 1-2 ml 30% salpetersyre (specifik vægtvægt 1,20). Hvis en hvid ring produceres ved grænsefladen mellem begge væsker, er prøven positiv. Reaktionen bliver positiv, hvis proteinet er større end 3,3 mg%. Nogle gange opnås en hvid ring, når der er store mængder urater. I modsætning til proteinringen vises uratringen ikke ved grænsen mellem de to væsker, men lidt højere. Larionova foreslår at anvende i stedet for 30% salpetersyre som en reagens 1% opløsning af salpetersyre i en mættet opløsning af natriumchlorid; Dette giver store besparelser i salpetersyre.

Prøve med zhelezystosinerodisty kalium og eddikesyre. Denne reaktion gør det muligt at isolere serumproteiner fra nukleoalbumin.

Lige mængder urin hældes i to rør. I en af ​​dem tilsættes et par dråber 30% opløsning af eddikesyre. Hvis der opnås uklarhed sammenlignet med kontrolrøret, indeholder urin nukleoalbumin. Hvis der ikke opstår uklarhed, blandes indholdet af begge rør og deles igen i to dele. I et af de to reagensglas tilføjes et par dråber (et overskud kan gøre en positiv prøve til en negativ) af en 10% opløsning af det gule blodsalt (kaliumferrocyanidsirup). I nærvær af valleproteiner opnås turbiditet.

Med koncentreret urin indeholdende store mængder urinsyre og urat, skal en prøve med ferrinsyre og sirup kalium og eddikesyre udføres efter fortynding (2-3 gange) urin med vand. Ellers kan der forekomme uklarhed forårsaget af udfældet urinsyre.

Dette er især vigtigt i undersøgelsen af ​​urin hos spædbørn, som indeholder en masse urinsyre og urater.

Af de øvrige kvalitative prøver for protein i urin, der er baseret på proteinudfældning, har de fundet anvendelse: Kogtest, Esbach, Perdi, Roberts, Almen, Balloni, Buro, Claudius, Corso, Dome, Goodmann-Suzanne, Jolla, Exton, Kamlet, Kobuladze, Liliendal-Petersen, Polacci, Pons, Spiegler, Tanre, Thiele, Brown, Tsushia osv.

Ved fremstilling af højkvalitetsprøver til protein i urinen, baseret på deponering af proteiner, er det nødvendigt at overholde følgende generelle regler, hvis brud fører til betydelige fejl i undersøgelsen.

1. Den urin, der skal testes, skal være sur. Med en alkalisk reaktion surges urinen lidt med eddikesyre. Fremstillingen af ​​en prøve med alkalisk urin, i tilfælde hvor en syre anvendes som reagens, kan føre til neutralisering af syren og til et negativt resultat med en positiv reaktion. Dette gælder især for sulfosalicylsyre-testen, da syren tilsættes i meget små mængder og let kan neutraliseres.

2. Undersøgt urin skal være gennemsigtig.

3. Prøver til at etablere protein i urinen skal altid ske i to rør, hvoraf den ene tjener som kontrol. Uden et kontrolrør kan man ikke mærke let turbiditet under reaktioner.

4. Mængden af ​​tilsat syre i prøverne må ikke være for stor. En stor mængde syre kan føre til dannelsen af ​​opløseligt acidolbumin og til omdannelsen af ​​en positiv prøve til en negativ.

På grund af deres enkle teknik fortjener kolorimetriske tørprøver en masse opmærksomhed. Når disse prøver anvendes, har virkningen det protein har på indikatorens farve i bufferopløsningen (såkaldte proteinfejlindikatorer). Et filterpapir infunderet med citronsyrebuffer og bromphenolblåt som indikator absorberes i urin i kort tid. Prøven er positiv, hvis den bliver blågrøn farve. Sammenligning af intensiteten af ​​farve med farvepapirstandarder er det muligt at udlede omtrentlige og kvantitative konklusioner. Indikatorpapir sælges i pakninger med tilsvarende farvestandarder, som universal indikatorpapir.

Metoder til kvantitativ bestemmelse af urinprotein
Mange metoder er blevet foreslået til kvantitativ bestemmelse af urinprotein. Præcise kvantitative metoder til bestemmelse af proteiner i biologisk materiale anvendes ikke i vid udstrækning til bestemmelse af protein i urinen på grund af komplekse og tidskrævende teknikker. Volumetriske metoder er udbredt, især Esbach-metoden. De er meget enkle, men er desværre ikke meget præcise. Metoderne fra Brandberg-Stolnikov-gruppen, som giver mere præcise resultater end volumetriske metoder, med en relativt simpel teknik, er også bekvem for klinikken. I nærværelse af et fotometer eller nephelometer er nephelometriske metoder også hensigtsmæssige.

Esbach Metode. Han blev foreslået af den parisiske læge Esbach i 1874. Et specielt rør (Esbachs albuminometer) hældes med urin og reagens. Røret er forseglet med en gummiprop, grundigt omrørt (uden at slå!) Og efterladt i opretstående stilling til næste dag. Rapportér divisionen, som når kolonnen af ​​proteinpræcipitat. Det viste tal viser proteinindholdet. Det er meget vigtigt med Esbach-metoden, at urinen er sur. Alkalisk urin kan neutralisere de sure bestanddele af reagenset og forhindre udfældning af proteiner.

Fordelene ved metoden: Den er enkel og praktisk i praksis.

Ulemper: Metoden er unøjagtig, resultatet opnås efter 24 - 48 timer.

Brandberg-Stolnikov metode. Det er baseret på Gellers kvalitetsprøve. Gellers prøve kan anvendes til kvantitativ bestemmelse, da det giver et positivt resultat med et proteinindhold på over 3,3 mg%. Dette er den ultimative proteinkoncentration under hvilken prøven bliver negativ.

Ændring af Ehrlich og Althausen. Sovjetforskerne S. L. Ehrlich og A. Ya. Altgauzen ændrede Brandberg-Stolnikov-metoden, hvilket angiver mulighederne for at forenkle forskningen og spare tid i sin produktion.

Den første forenkling er forbundet med tidspunktet for udseendet af ringen. Det bestemmes nøjagtigt tidspunktet for hans udseende uden nødvendigvis at overholde det 2. og 3. minut.

Den anden forenkling gør det muligt at fastslå, hvilken slags opdræt der skal gøres. Forfatterne har bevist, at den ønskede fortynding kan fastsættes omtrent ved den opnåede ringtype. De skelner filamentøst, bredt
og kompakt ring.

Af de nephelometriske metoder fortjener Kingsberry og Clark-metoden at blive noteret. 2,5 ml filtreret urin hældes i en lille gradueret cylinder, genopfyldes med 3% vandig opløsning af sulfosalicylsyre til 10 ml. Rør grundigt, og efter 5 minutter fotometeriseres i en 1 cm kuvette med et gult filter, der bruger vand som kompensationsvæske. Med Pulfrich-fotometeret viser den uddødelighed, der er multipliceret med 2,5, mængden af ​​protein i% o. I tilfælde af at udryddelsesindekset er højere end 1,0, er urinen forfortyndet 2 gange, 4 gange eller endnu mere.

For at få en klar ide om mængden af ​​proteiner udskilt i urinen er det nødvendigt at bestemme ikke kun deres koncentration i en separat del af urinen, men også deres samlede daglige mængde. For at gøre dette skal patientens urin indsamles i 24 timer, måle dens volumen i milliliter og bestemme proteinkoncentrationen i en del af den daglige urin i g%. Mængden af ​​proteiner udskilt i urinen om 24 timer bestemmes afhængigt af den daglige mængde urin i gram.

Den kliniske betydning af protein i urinen

Human urin indeholder normalt små mængder protein, der ikke kan fastslås ved almindelige test af urinproteinprøve. Udskillelse af store mængder protein, hvor almindelige kvalitetsprøver til protein i urinen bliver positive - et unormalt fænomen, der kaldes proteinuri. Proteinuri er kun fysiologisk hos nyfødte, i de første 4-10 dage efter fødslen. Navnet albuminuri, der almindeligvis anvendes, er forkert, fordi ikke blot albumin, men også andre typer af proteiner (globuliner mv) udskilles i urinen.

Proteinuri, som et diagnostisk symptom, blev opdaget i 1770 af Cotuno.

Det vigtigste funktionelle renalproteuri hos børn er som følger:

1. Fysiologisk proteinuri af den nyfødte. Det forekommer hos de fleste nyfødte og har ingen negativ betydning. Det forklares af et umodent nyrfilter, fødselsskader eller tab af væsker i de første dage af livet. Fysiologisk proteinuri forsvinder den 4.-tiende dag efter fødslen (i for tidlige babyer senere). Mængden af ​​protein er lille. Det er et nukleobalbumin.

Neonatal albuminuri, som varer lang tid, kan være et symptom på medfødte lunger.

2. Stroke albuminuri. De er forårsaget af at overskride tærsklen for nyrenfilterets normale irritabilitet ved væsentlige mekaniske, termiske, kemiske, mentale og andre irritationer - tab af væske hos spædbørn (dehydreringsproteinuri), koldt badning, rigelig proteinrig mad (foderproteuri), palpation af nyren (palpatorisk albuminuri) fysisk overarbejde, frygt osv.

Strokealbuminuri fremstår lettere hos børn i en tidlig alder end hos børn i ældre alder og hos voksne, da nyrerne til et spædbarn og et lille barn lettere er irriteret. Dehydrering albuminuri (foderforstyrrelser, hydrolerbarhed, toksikose, diarré, opkastning) er særlig almindelig hos spædbørn.

Stroke albuminuri er godartet. De forsvinder straks efter afskaffelsen af ​​deres årsager. Lejlighedsvis leukocytter, cylindre og røde blodlegemer findes nogle gange i sedimentet. Protein er oftest et nukleobalbumin.

3. Ortostatisk proteinuri. Denne tilstand er karakteristisk for børn i førskole og skolealder. Det forekommer på grundlag af vasomotoriske forstyrrelser i blodtilførslen til nyrerne. Typisk for ortostatisk albuminuri (dermed dets navn) er, at det kun vises, når barnet står, når rygsøjlen er i lordotisk stilling. I den bageste position forsvinder den. Nucleoalbuminet frigives. I tvivlsomme tilfælde kan du ty til ortostatisk oplevelse, som består af følgende: om aftenen, en time før du ligger ned, tømmer barnet blæren; om morgenen kommer han ud af sengen igen og frigiver urinen igen. Denne urin indeholder ikke protein. Derefter lægges barnet på knæ i 15-30 minutter med en pind bag ryggen mellem albuerne i begge hænder bøjet. Det skaber en position af lordose, hvilket fører til frigivelse af protein uden ændringer i sediment.

Med ortostatisk albuminuri kan 8-10 g protein frigives pr. Dag.

Økologisk renal proteinuri har stor klinisk betydning mellem alle proteinuri. De er forårsaget af organiske nyresygdomme (nephritis, nephrosis, nephrosclerosis). Proteinuri er et af de vigtigste og mest kendte symptomer på organisk nyresygdom.

1. I akut og kronisk glomerulonefrit forekommer proteinuri regelmæssigt. Mængden af ​​protein er moderat, og der er ingen parallel mellem graden af ​​proteinuri og sværhedsgraden af ​​sygdommen. I modsætning hertil sker kronisk og mere alvorlig jade ofte med mindre mængder protein end akut. Efter akut nefritis, undertiden i lang tid (år), etableres små mængder protein i urinen, der ikke har nogen patologisk betydning ("resterende albuminuri"). Det må ikke glemmes, at "nefritis uden proteinuri" også kan forekomme. Nogle gange findes protein i en del af urinen, og i en anden er det ikke. Forholdet mellem albumin og globuliner i akut nefrit er lavt, og i kronisk nefrit er højere.

2. I tilfælde af nefrosclerose er mængden af ​​proteiner i urinen ret ubetydelig, ofte former for sygdommen uden protein i urinen.

3. Af alle nyresygdomme forekommer nephrose med den mest udtalte proteinuri.

4. I tilfælde af infektiøse og toksiske tilstande findes den såkaldte febrile og giftige proteinuri. Disse er akut nephrose, hvor mængden af ​​protein er lille. Denne gruppe omfatter også proteinuri i konvulsive tilstande (krampe), hyperthyroidisme, gulsot, invaginationer, enterocolitis, forbrændinger, alvorlig anæmi osv. Disse albuminuri er godartede og går hurtigt (forbigående albuminuri).

5. Når blod stagnerer i nyrerne, forekommer den såkaldte kongestiv albuminuri, som er karakteristisk for kardiovaskulære patienter i dekompensationstrinnet. Det findes også i ascites og tumorer i maven.

I febril, toksisk og kongestiv albuminuri er den øgede permeabilitet af nyrfilteret særligt udtalt. Ifølge nogle forfattere forekommer mange på disse proteinuri uden organisk skade på renal parenchyma.

Extrarenal albuminuri skyldes sædvanligvis protein urenheder (sekreter, nedbrudte celler), der udskilles af syge urinveje og kønsorganer. Ofte findes eksternalbuminuri som følge af cystopielitis (pyuria), mindre ofte på grund af vulvovaginitis, calculus og urinvejs tumorer.

Når extrarenal albuminuri i sedimentet finder et stort antal leukocytter og bakterier. Nyrer forekommer næsten aldrig. Mængden af ​​protein er lille. Filtreret eller centrifugeret urin giver normalt ikke en positiv proteinprøve.

Hos mennesker, der genvinder sig fra pyelitis, forsvinder albuminuri efter bakteriuri og pyuria.

Det bør understreges som et karakteristisk fænomen, at organiske nyresygdomme i begyndelsen af ​​barndommen er yderst sjældne, og derfor er økologisk proteinuri også sjælden. Af dem findes hovedsageligt febrile og giftige. I modsætning til økologisk proteinuri er slagtilfælde af albuminuri meget almindelig hos unge børn.

Hos ældre børn er økologisk proteinuri mere funktionelt. Generelt er funktionel proteinuri med alderen mindre almindelig og organisk oftere.

Elektroforetiske undersøgelser af proteiner i urinen

En række forfattere anvender den elektroforetiske metode til undersøgelse af proteiner i urinen (uroproteiner). Fra det opnåede elektroforegram er det klart, at de har samme kvalitative sammensætning som plasmaproteiner. Dette indikerer, at proteiner i urinen stammer fra plasmaproteiner.

Kvalitativ og kvantitativ bestemmelse af protein i urinen.

Normale værdier: Normalt protein i urinen er indeholdt i minimale mængder, der ikke påvises ved de sædvanlige kvalitative reaktioner. Den øvre grænse for normen for protein i urinen er 0,033 g / l. Hvis proteinindholdet er højere end denne værdi, bliver proteinprøver af høj kvalitet positiv.

Den kliniske betydning af definitionen:

Udseendet af protein i urinen hedder proteinuri. Proteinuri kan være falsk og nyre. Extrarenal proteinuri kan være i nærværelse af urenheder af proteinoprindelse fra kønsorganerne (vaginitis, urethritis osv.), Mens mængden af ​​protein er ubetydelig - op til 0,01 g / l. Renal proteinuri kan være funktionel (med hypotermi, fysisk anstrengelse, feber) og organisk - med glomerulonefritis, pyelonefritis, nefritis, nephrose, nyresvigt. I renal proteinuri kan proteinindholdet være fra 0,033 til 10-15 g / l, nogle gange højere.

Metodens princip: Baseret på det faktum, at protein under virkningen af ​​uorganiske syrer koagulerer (bliver synligt). Graden af ​​uklarhed afhænger af mængden af ​​protein.

Påvisning af protein i urinen med 20% sulfosalicylsyre.

Reagenser: 20% opløsning af sulfosalicylsyre. Udstyr: mørk baggrund.

1. Krav til urin: Urinen skal være sur (eller lidt syrlig). PH skal være gennemsigtig. I dette øjemed centrifugeres urinen. Alkalisk urin surgøres til et svagt surt reaktionsmedium ved anvendelse af indikatorpapir til kontrol.

2. I 2 reagensglas med samme diameter hæld 2 ml fremstillet urin. 1 testrør - kontrol, 2 - oplevelse. Til testrøret tilføj 4 dråber 20% sulfosalicylsyre.

3. Resultatet er markeret på en mørk baggrund.

4. I nærvær af protein vokser urinen i testrøret grumt.

Kvalitetsbestemmelse af protein i urin ved hjælp af teststrimler.

For at identificere proteinuri anvendes forskellige monoteststrimler: Albufan, Albustiks, Biofan E og politiske tests: Triscan, Nonafan og andre.

Påvisning af protein i urinen ved Roberts - Stolnikovs metode.

Metodens princip: Baseret på det faktum, at protein under virkningen af ​​uorganiske syrer koagulerer (bliver synligt). Graden af ​​uklarhed afhænger af mængden af ​​protein (dvs. Geller-ringtesten). Når proteinkoncentrationen i urinen er 0,033 g / l, vises en tynd hvid tråd ved udgangen af ​​3 minutter efter lægning af urin.

Reagenser: 50% opløsning af salpetersyre eller Roberts reagens (98 dele af en mættet opløsning af natriumchlorid og 2 dele koncentreret saltsyre) eller reagens af Larionic (98 dele af en mættet opløsning af natriumchlorid og 2 dele koncentreret salpetersyre).

Udstyr: mørk baggrund.

1. Krav til urin: Urinen skal være sur (eller lidt syrlig). PH skal være gennemsigtig. I dette øjemed centrifugeres urinen. Alkalisk urin surgøres til et svagt surt reaktionsmedium ved anvendelse af indikatorpapir til kontrol.

2. Hæld 2 ml 50% opløsning af salpetersyre eller et af reagenserne i et reagensglas, og hæld derefter forsigtigt det samme volumen forberedt urin langs rørets væg med en pipette.

3. Prøven forbliver i 3 minutter

4. Rapportér resultatet efter 3 minutter. Resultatet er markeret på en mørk baggrund i transmitteret lys. Hvis ringen er bred, kompakt, bliver urinen fortyndet med destilleret vand og igen lagdelt på reagenset.

5. Urin fortyndes, indtil der efter 3 minutter dannes en tynd trådformet ring.

6. Beregningen af ​​proteinindholdet i urinen fremstilles ifølge formlen:

C = 0,033 g / l x fortyndingsgrad.

194.48.155.245 © studopedia.ru er ikke forfatteren af ​​de materialer, der er indsendt. Men giver mulighed for fri brug. Er der en ophavsretskrænkelse? Skriv til os | Kontakt os.

Deaktiver adBlock!
og opdater siden (F5)
meget nødvendigt

Metodisk udvikling af praktiske klasser "Bestemmelse af protein i urinen" (1 kursus)

Capital Training Center
Moskva

Emne: Bestemmelse af urinprotein.

Formål: At studere undersøgelsen af ​​urins kemiske egenskaber.

At studere de kvantitative og kvalitative metoder til bestemmelse af urinprotein

Lær de grundlæggende principper for at arbejde med teststrimler på automatiske analysatorer.

Type beskæftigelse: praktisk (6 timer)

Den studerende skal vide:

Kvalitative prøver til proteinbestemmelse.

Roberts - Stolnikov metode.

Bestemmelse af protein 3% SSC.

Biuret-metode til proteinbestemmelse (THU).

Den diagnostiske værdi af forskningsindikatorer.

Den studerende skal kunne:

Forbered en arbejdsplads til urintestning.

Forbered reagenser, fade og udstyr til undersøgelsen.

At bestemme urins kemiske egenskaber (protein i urinen ved kvalitative og kvantitative metoder).

Arbejde med blanke produkter (udformning af analysedannelser).

Korrekt fortolke resultaterne af undersøgelsen.

Midler til at nå målet:

1. Arbejde med noter, uddannelses- og speciallitteratur.

2. Forberedelse til praktiske øvelser ved brug af lærerens metodiske anbefalinger, gennemførelse og gennemførelse af praktisk arbejde.

3. Arbejde med informative midler til uddannelse i elektroniske og papirmedier.

Udstyr til studielokale og kontorarbejdspladser:

pladser af antal studerende;

lærerens arbejdsplads

specialiserede møbler og udstyr.

Tekniske træningsredskaber:

computere til at udstyre lærerens og elevers arbejdsplads;

tekniske anordninger til audiovisuel visning af oplysninger

audiovisuelle undervisningsmidler (præsentation, træningsvideo).

Resultatet af at mestre lektionen er:

Dannelse af praktiske faglige færdigheder og første praktisk erfaring, herunder faglige (PC) og generelle (QA) kompetencer:

PC 1.1. Forbered en arbejdsplads til laboratorieundersøgelser.

PC 1.2. At udføre laboratorieundersøgelser af biologiske materialer.

PC 1.3. Optag resultaterne af undersøgelsen.

PC 1.4. Bortskaf brugt materiale, desinficere og sterilisere brugt laboratorieglas, værktøj og beskyttelsesudstyr.

OK 1. Forstå naturen og samfundsmæssig betydning af deres fremtidige erhverv, viser en stabil interesse i den.

OK 2. Organiser dine egne aktiviteter, vælg standardmetoder og måder at udføre professionelle opgaver på, evaluere deres effektivitet og kvalitet.

OK 6. Arbejde i et hold og et hold, kommunikere effektivt med kolleger, ledelse, patienter.

OK 9. At blive styret under forholdene for teknologiændring i faglig aktivitet.

OK 13. At organisere en arbejdsplads i overensstemmelse med kravene til arbejdsbeskyttelse, industriel hygiejne, smitsomme og brandsikkerhed.

I modul. Den teoretiske del med elementerne i selvstændigt arbejde

Opgave nr. 1. Undersøg og redegør for studiemateriale i arbejdsbøger.

En sund person indeholder normalt mindre end 0,002 g / l og sjældent op til 0,012 g / l protein, og normalt kaldes dette urinproteinindhold "i form af spor" og detekteres ikke ved konventionelle kemiske metoder i sund human urin.

Proteinindholdet i dele af urin indsamlet på forskellige tidspunkter af dagen kan variere betydeligt.

Protein i urinen hedder proteinuri.

Afhængig af det daglige tab af protein skelnes følgende grader af proteinuri: moderat - op til 1 g; medium - fra 1 til 3 g; udtalt - mere end 3 g.

Der er to hovedtyper proteinuria:

Proteinuri, forårsaget af sygdomme i urinvejen;

proteinuri, med læsioner (sygdomme) af nyrerne.

Proteinuri forbundet med inflammatoriske processer i urinvejen ledsaget af urin hos et betydeligt antal leukocytter eller erythrocytter, som dog ikke eliminerer den samtidige indtræden af ​​protein i urinen fra nyretanken proteinindhold overstiger sjældent 1 g / l.

Renalproteuri er i de fleste tilfælde forbundet med øget permeabilitet af glomeruli og er opdelt i 2 grupper:

Til fysiologisk proteinuri indgår tilfælde af midlertidigt udseende af protein i urinen, der ikke er forbundet med sygdomme:

efter at have spist en stor mængde fødevarer rig på ikke-denaturerede proteiner (råkød, råæg);

med intensivt muskulært arbejde (lange vandreture, sportsbegivenheder);

når man tager et koldt bad eller et brusebad

med stærke følelsesmæssige oplevelser;

med epileptiske anfald.

Skelne mellem ortostatisk eller ungdommelig proteinuria, der forekommer hos børn og unge og passerer i alderen. I det differentialdiagnostiske forhold er det af praktisk betydning, at ortostatisk albuminuri ofte findes i genoprettelsesperioden fra akut glomerulonephritis.

Patologisk renal proteinuri kan være resultatet af organiske sygdomme i nyrerne og andre organer og systemer: akut glomerulonefritis; kronisk glomerulonefritis; akut pyelonefritis; kronisk pyelonefritis; nephropati af gravide kvinder; forskellige sygdomme forbundet med feber; alvorlig kronisk hjertesvigt og mild nyresygdom; lipoid nefrose; nyre tuberkulose; hæmoragiske feber hæmoragisk vaskulitis; alvorlig anæmi hypertension osv.

Opgave nr. 2. Omskrive og tegne diagrammer af laboratoriemetoder til bestemmelse af protein i urinen.

Laboratoriemetoder til bestemmelse af protein i urinen

Der er kvalitative og kvantitative metoder til bestemmelse af protein i urinen, de er baseret på koagulering af protein i urinvolumen eller på grænsen af ​​medier (urin og syre); mens måling af graden af ​​koagulation gør prøven kvantitativ.

prøve med 20% sulfosalicylsyre (standardiseret);

Geller ring test (i øjeblikket ikke brugt);

Proteindetektion ved hjælp af indikatorpapir (strimler) og teststrimler.

den samlede Brandberg-Roberts-Stolnikov metode

med 3% sulfosalicylsyre.

Kvalitative metoder til bestemmelse af protein i urinen

Opgave nr. 3. Bestemmelse af protein i urinen ved anvendelse af en standardiseret prøve med 20% sulfosalicylsyre

Metodens princip: Baseret på koagulering af protein i urinvolumen eller på grænsen af ​​medier (urin og syre)

Retter, udstyr og reagenser:

20% sulfosalicylsyre (2-hydroxy-5-sulfobenzoesyre C ₇ H ₅ 0 ₆ S).

3 ml filtreret urin

2 stk kemiske reagensglas

Tre rør af filtreret urin indføres i to rør, 6-8 dråber sulfosalicylsyre tilsættes til en af ​​dem (erfarne). På en mørk baggrund sammenlignes begge rør.

Fortolkning af resultaterne:

Opacificering i testrøret indikerer tilstedeværelsen af ​​protein i urinen - prøven er positiv.

Bemærk. Alkalisk urin surgøres før testen ved at tilføje et par dråber 10% eddikesyreopløsning.

Opgave nr. 4. Bestemmelse af protein ved brug af Geller-ringtesten

Metodeprincippet: Ringprøven er baseret på det faktum, at når salpetersyre tilsættes til urinen ved grænsefladen (syreurin) i nærværelse af protein, koagulerer den og en hvid ring fremkommer.

Retter, udstyr og reagenser:

- reagenser: 30% opløsning af salpetersyre (HNO 3) (d = 1,2) eller laryonsyre: 20-30 g natriumchlorid (NaCl) opløst i 100 ml destilleret vand ved opvarmning, afkøling, filtrering; 1 ml koncentreret HNO3 tilsættes til 99 ml af filtratet.

I røret hæld 1 - 2 ml af en 30% opløsning af HNO3 eller Larionovas reagens, og lag forsigtigt den samme mængde filtreret urin på væggen.

Fortolkning af resultaterne:

Udseendet ved grænsen af ​​to væsker mellem 2. og 3. minut af en tynd hvid ring indikerer tilstedeværelsen af ​​protein i urinen.

Tegn en ordning til bestemmelse af proteinet

Proteinkvantificering

Metodeprincippet: Geller-ringprøven er baseret på det faktum, at når salpetersyre tilsættes til urinen ved grænsefladen (syreurin) i nærvær af protein, koagulerer den og en hvid ring fremkommer.

Retter, udstyr og reagenser:

Biologisk væske (urin);

I røret hæld 1 - 2 ml af en 30% opløsning af HNO3 eller Larionovas reagens, og lag forsigtigt den samme mængde filtreret urin på væggen.

Fortolkning af resultaterne:

Udseendet ved grænsen af ​​to væsker mellem 2. og 3. minut
en tynd hvid ring indikerer tilstedeværelsen af ​​protein i en koncentration på ca. 0,033 g / l. Hvis en ring fremkommer tidligere end 2 minutter efter laminering, skal urinen fortyndes med destilleret vand og genoptages med fortyndet urin. Graden af ​​fortynding af urin udvælges afhængigt af typen af ​​ring, dens bredde, kompaktitet og udseendestidspunktet.

Med en trådlignende ring, som optrådte tidligere 2 minutter, bliver urinen fortyndet 2 gange, med en bred en - 4 gange, med en kompakt en - 8 gange osv. Proteinkoncentrationen beregnes ved at multiplicere fortyndingen med 0,033 g / l.

En hvid ring kan danne, når der er et stort antal urater; I modsætning til protein forekommer den lidt over grænsen af ​​to væsker og opløses, når den opvarmes lidt.

Opgave nr. 6. Bestemmelse af mængden af ​​protein i urinen med 3% sulfosalicylsyre

Princippet om metoden: Proteinkoncentrationen i urinen er proportional med den turbiditet, der opstår, når den koagulerer sulfosalicylsyre

Retter, udstyr og reagenser:

0,9% natriumchloridopløsning;

1% albuminstandardopløsning - 1 g frysetørret albumin (fra humant eller kvægserum) opløses i en lille mængde 0,9% NaCl-opløsning i en kolbe med en kapacitet på 100 ml og dannes derefter op til mærket med det samme opløsningsmiddel. Reagenset stabiliseres ved tilsætning af 1 ml 5% natriumazidopløsning (NaN3). Når det opbevares i køleskabet, er reagenset stabilt i 2 måneder.

1,25 ml filtreret urin indføres i et reagensglas, 3,75 ml af en 3% sulfosalicylsyreopløsning tilsættes og blandes. Efter 5 minutter bliver prøven fotograferet på en PEC ved en bølgelængde på 590-650 nm (orange eller rødt lysfilter) mod kontrollen i en kuvette med en optisk sti længde på 5 mm. Kontrol tjener som en prøve, hvori 3,75 ml af en 0,9% natriumchloridopløsning sættes til 1,25 ml urin. Proteinkoncentrationen beregnes i overensstemmelse med en kalibreringsgraf, for hvilken konstruktionen der fremstiller fortyndinger af en standard albuminopløsning. (se tabel). Fra hver udtaget fortyndet opløsning tages 1,25 ml og behandles som eksperimentelle prøver.

Fremstilling af fortyndinger til planlægning af kalibrering

Standardopløsning, ml

0,9% natriumchloridopløsning, ml

Proteinkoncentration, g / l

Rektilinær afhængighed af størrelsen af ​​udryddelsen og proteinkoncentrationen opretholdes op til 1 g / l. Ved højere proteinkoncentrationer skal prøven fortyndes og tage hensyn til fortyndingen i beregningen.

Hvis der er stoffer indeholdende iod i urinen, kan der opnås falske positive resultater. Derfor kan testen ikke anvendes til patienter, der tager iodpræparater, eller som har gennemgået forskning ved anvendelse af jodholdige radioaktive forbindelser. Falske positive J-reaktioner under undersøgelsen kan skyldes at tage sulfanilamidlægemidler, store doser penicillin og ved høje koncentrationer i urinsyre af urinsyre.

Tegn en ordning til bestemmelse af proteinet

Opgave nr. 7. Bens-Jones-detektion i urin

Metodeprincippet: Baseret på reaktionstermiprecipitationen

Retter, udstyr og reagenser:

Reagens: 2M acetatbuffer pH 4,9.

4 ml filtreret urin blandes med 1 ml bufferopløsning og opvarmes i 15 minutter i et vandbad ved 56 ° C.

Fortolkning af resultaterne:

I tilstedeværelsen af ​​Bens-Jones protein i urinen vises et udtalt sediment i de første 2 minutter.

Når proteinkoncentrationen er mindre end 3 g / l, kan prøven være negativ, hvilket er ret sjældent, da koncentrationen af ​​Bens-Jones-protein i urinen normalt er meget signifikant.

Den mest pålidelige påvisning af Bens-Jones-proteinet er ved udfældning ved en temperatur på 40-60 ° C. Imidlertid kan der ikke forekomme sedimentering i for sure (pH-værdi under 3,0) eller for alkalisk (pH over 6,5) urin, med lav relativ densitet af urin og lav koncentration af Bens-Jones beige (mindre end 3 g / l).

Tegn en ordning til bestemmelse af proteinet

II modul. Uafhængigt arbejde med forskningsfasen

Opgave nr. 1. Undersøg og redegør for ansøgningen №1 "Påvisning af protein ved hjælp af diagnostiske teststrimler"

- Hent prøver af biologisk væske (urin) fra læreren, nummer prøverne;

- Udfør en urintest ved hjælp af diagnostiske teststrimler

- Vurder resultatet (norm, patologi). Antag grunden til protein i urinen.

- Skriv resultatet i analyseformularerne, overlever dem til læreren.

"Påvisning af protein ved hjælp af diagnostiske teststrimler"

Princip. Protein ændrer farven på indikatoren på strippen. Indikatorerne er pakket i et sæt med 100 strimler, som opbevares i et tæt lukket blyant på et køligt og tørt sted.

Regler for arbejde med diagnostiske teststrimler

Når du arbejder med diagnostiske teststrimler, skal du overholde følgende regler:

- Hold diagnostiske teststrimler i tæt lukkede beholderpakker;

- at opbevare sager på et mørkt, tørt og køligt sted ved en temperatur på højst 30ºС, men ikke i køleskabet;

- Udsæt ikke strimler for fugt og direkte sollys, høj temperatur og flygtige kemikalier;

- få kun det strengt nødvendige antal strimler, og luk derefter straks sagen;

- Rør ikke ved de diagnostiske zoner med fingrene.

Testregler

1. Til undersøgelsen skal du bruge morgen urin opsamlet i en plastik urinbeholder (eller rene tørre retter). Bland den leverede urin, men centrifuger ikke.

Ved anvendelse af ikke-standardjusteret emballage forårsager rester af vaskemiddel i urinopsamlingsbeholderen falske resultater.

2. Tag en teststrimmel fra blyantposen.

3. Luk straks sagen med fabrikslåget, beskytt strimlen mod fugt.

4. Sænk indikatorpapirstrimlerne i 2-3 sekunder ind i urinen, der undersøges, og fjern dem straks.

5. For at fjerne overskydende fugt fra strimlernes diagnostiske zoner, kør det med en lang kant langs kanten af ​​beholderen (eller anden beholder, hvor urinen leveres) eller fastgør denne kant af strimlen til filterpapir.

Det er umuligt at vaske overskydende urin fra diagnostiske zoner.

6. Efter den tid, der er angivet på etiketten på beholderen eller i instruktionerne for hver test, udløber, sammenlignes farven på den tilsvarende diagnostiske zone med farveskalaen på etiketten på beholderen med striber (standard). Testproceduren er vist i figurerne 1-7.

7. Reaktionen vurderes som positiv eller negativ. Eller udtrykt numerisk i g / l. (se tegning №8).