VEJLEDNING

om anvendelsen af ​​et reagenssæt til den kolorimetriske bestemmelse af protein i urin og cerebrospinalvæske med pyrogallolrød

Pakken indeholder:

200 ml (2 x 100 ml P + 2 x 2 ml kalibrator)

500 ml (2 x 250 ml P + 2 x 5 ml kalibrator)

Metodeprincippet

Når protein interagerer med pyrogallol rødt og

natriummolybdat danner et farvet kompleks,

hvis farveintensitet er proportional med koncentrationen

Kit Indhold

Reagens (P) - pyrogallol rød opløsning i succinat

buffer klar til brug.

Kalibratorer - Lavkalibreringsproteinløsninger (0,20

g / l, der anvendes til bestemmelse af mikroproteinuri) og høj

(0,50 g / l, der anvendes til at bestemme proteinuri)

proteinkoncentration indeholdende 70% albumin og 30%

globulin klar til brug.

Opbevaringssæt - ved en temperatur på 2-8 ° C i en pakke

producent for hele holdbarheden.

Stabilitet af reagens og kalibratorer

Efter åbning er reagenset stabilt i 6 måneder, kalibratorer - 3 måneder. når den opbevares i tæt lukket form ved en temperatur på 2-8 ° C på et mørkt sted.

Normale værdier

• urin - op til 0.120 g / l (op til 0.141 g / dag);
• cerebrospinalvæske (CSF) - 0,150-0,450 g / l.

Prøver til analyse

Urin, ikke-hemolyseret CSF.

Forberedelse til analyse

1. CSF og urin centrifugeret i 10 minutter ved 2700-4000 omdr./min.
2. Brug rene, velvasket rør til analyse. Testen for testrørernes egnethed til analyse er fraværet af farveændring i reagenset. Hvis reagenset bliver blåt uden tilsætning af en prøve, vil resultaterne af proteinbestemmelse overvurderes; Dernæst dispensere reagenset først og tilsæt derefter urin.
3. Ved opstilling af metoden bør nye kuvetter anvendes, da de ikke farves med reagenset og reaktionsprøven. Gamle plastkuvetter (uklar, ikke gennemsigtig) er ikke egnede til måling. Før brug skal du behandle de kuvetter, som var i brug som følger: Lad i 10 minutter i vaskeopløsningen (200 ml 5% hydrogenperoxidopløsning eller 1 ml vaskemiddel), skyll derefter med vand og destilleret vand mindst 10 gange. Kittet er egnet til analyse på biokemiske halvautomatiske og automatiske analysatorer.

Analyse Bølgelængde: 598 (578-620) nm; Optisk sti længde: 10 mm; temperatur: 18-25 ° C.

Reagens og kalibrator bør opbevares ved stuetemperatur i ca. 30 minutter før analyse.

Fremgangsmåde 1 (bestemmelse af proteinuri)

Prøver, der skal blandes, holdes i 10 minutter ved stuetemperatur (18-25 ° C). Mål den optiske tæthed af de eksperimentelle (E) og kalibrerings (EC) prøver mod kontrollen (blank) prøven. Farven er stabil i 1 time.

HVORDAN MÅLGØRES VI I URINSULFOSALYCYLMETODEN?

I vores land anvendes en turbidimetrisk metode ved anvendelse af en sulfosalicylsyre (sulfosalicylmetode), som først blev foreslået af Kingsbury F, hovedsagelig til bestemmelse af proteinkoncentrationen i urinen. B. og medforfattere i 1926. Samtidig bruger laboratorierne i de udviklede lande praktisk taget ikke denne metode, hvilket resulterer i, at laboratoriekvalitetskontrollen af ​​urinproteinanalysen viser et fald i variationskoefficienten. Så i 1993 udførte 60% af de franske kliniske diagnostiske laboratorier bestemmelsen af ​​urinproteinkoncentrationen ved anvendelse af en kolorimetrisk metode ved anvendelse af pyrogallol rødt farvestof (pyrogallolmetode) og kun 10% ved anvendelse af sulfosalicylmetoden. Diagnostiske kits til bestemmelse af urinprotein baseret på pyrogallolmetoden produceres af sådanne kendte firmaer som Bayer D iagnostics, Beckman, Biodirect, Biocon Diagnostics, Bio-Rad Laboratories, Eurodiag, Kone, Merck, Randox, Serono, Sentinel CH, Sigma. Desværre er der i vores land, af økonomiske årsager og dels på grund af manglende erfaring, kolorimetriske metoder til bestemmelse af urinprotein, stadig meget lidt anvendt.

Spørgsmålet opstår - hvor retfærdigt det er, at laboratoriernes afslag i industrilande ikke er den enkle og vigtigst billige metode. For at afklare dette problem sammenlignede vi resultaterne af bestemmelse af proteinkoncentrationen i patientens urin ved to metoder: sulfosalicylsyre [1] og pyrogallol [2].

Fremgangsmåden til måling af koncentrationen af ​​protein ved hver fremgangsmåde var som følger.

Reagenser: 3% sulfosalicylsyreopløsning, 0,9% natriumchloridopløsning,

Kalibrator (kalibreringsopløsning af serumalbumin, 50 g / l i natriumchloridopløsning, 0,9% og natriumazid, 0,095%) fra "Uni-Test - Total Protein" kit fremstillet af "Diakon DS" Om Unimed ".

Udstyr: spektrofotometer SF-2000 produceret af OKB "Spectr".

Målekurs: 0,5 ml filtreret urin og 1,5 ml af en 3% sulfosalicylsyreopløsning blev tilsat til en kvartskuvette med en optisk sti længde på 1 cm og omrørt. Efter 10 min blev den optiske densitet målt på et spektrofotometer ved en bølgelængde på 595 nm imod en blindprøve (kuvette med 0,5 ml urin og 1,5 ml 0,9% natriumchloridopløsning). Beregningen af ​​proteinkoncentrationen blev udført i overensstemmelse med kalibreringsplanen. Til dets konstruktion udtyndes en standardopløsning af humant serumalbumin i 0,9% natriumchloridopløsning med koncentrationer på: 0,025; 0,05; 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9 g / l. For hver af de fremstillede opløsninger blev måling udført på samme måde som med en urinprøve. Kalibreringsgraf er vist i figur 1.

Fig. 1. Kalibreringskurve til bestemmelse af protein i urinen ved sulfosalicylmetode.

Et kommercielt kit fremstillet af Biocon Diagnostik (Tyskland) - Flotest USP - Protein, en ultrafølsom metode baseret på det røde pyrogallol-molybdat-kompleks, blev anvendt.

Reagenser: pyrogallolrød, 0,06 mmol / l, natriummolybdat, 0,04 mmol / l, succinatpuffer 50 mmol / l, pH 2,5, detergenter 2%; Kalibrator (kalibreringsopløsning af serumalbumin, 50 g / l i natriumchloridopløsning, 0,9% og natriumazid, 0,095%) fra "Uni-Test - Total Protein" kit fremstillet af "Diakon DS" Om Unimed ". [3].

Udstyr: Biokemisk fotometer StatFax 1904 Plus ("Awareness Technology inc.", USA).

Kalibreringskurven for den beskrevne metode med forholdet mellem prøve / reagens - 1 / 12,5 blev opnået under anvendelse af specielt fremstillede opløsninger af serumalbumin: 0,05; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9; 1,0 g / l ved fortynding af kalibratoren (50 g / l) med 0,9% natriumchloridopløsning (fig. 2).

Figur 2. Kalibreringskurve for pyrogallol rød metode, Flotest USP reagens, Biocon Diagnostik (Tyskland) med et prøve / reagensforhold på 1 / 12,5.

80 μl blev taget fra hver proteinopløsning og blandet med 1,0 ml reagens; målt som urinprøver.

Fig. 3. Et diagram over sammenligneligheden af ​​resultaterne af måling af proteinindholdet i urinprøver ved hjælp af sulfosalicyl- og pyrogallolmetoder.

Kalibreringskurven for reagenset produceret af Unimed A / O og Biocon Diagnostik med et prøve / reagensforhold på 1/30 blev opnået ved anvendelse af specielt fremstillede opløsninger af serumalbumin: 0,05; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9; 1,0, 1,1; 1,2; 1,3; 1,4; 1,5; 1,6; 1.7; 1,75; 1,8; 1,85; 1,9; 2,0 g / l ved fortynding af kalibratoren (50 g / l) med 0,9% natriumchloridopløsning (fig. 4).

Fig. 4. Kalibreringskurver for Unimed A / O-reagenset (øverste graf) og Flotest USP-kit fra Biocon Diagnostik (nedre graf) med et prøve / reagensforhold på 1/30.

50 μl blev taget fra hver proteinopløsning og blandet med 1,5 ml reagens og målt som urinprøver.

I undersøgelsen blev den modificerede stærkt følsomme variant anvendt for at opnå maksimal følsomhed for pyrogallolmetoden. For dette er mængden af ​​tilsat urin blevet forøget. Målingskurs: 1 ml af hovedreagenset blev tilsat til alle rør, derefter blev 80 μl destilleret vand (blind) tilsat til det første rør, 80 μl centrifugeret urin blev tilsat til de resterende rør, inkuberet ved stuetemperatur i 10 minutter, og den optiske densitet af prøven blev målt mod emnet 600 nm bølgelængde og 650 nm differentialfilter

For at sammenligne metoderne til bestemmelse af koncentrationen af ​​protein i urinen blev 60 prøver af patientens urin målt ved sulfosalicyl- og pyrogallol-metoder.

Sensibiliteten af ​​metoder til måling af protein i urinen blev vurderet ved undersøgelse af forberedte vandige vandige opløsninger indeholdende lave koncentrationer af serumalbumin (fra 0 til 0,05 g / l). For pyrogallol- og sulfosalicylmetoder undersøgte vi også værdierne for uspecifik absorption på grund af farven af ​​urinprøven. Til dette blev den optiske tæthed af urinprøver målt, hvor i stedet for sulfosalicylsyre eller pyrogallolreagens blev tilsat en ækvivalent mængde saltvand.

For at vurdere virkningen af ​​matrixen (urin) på resultaterne af sulfosalicylmetoden blev følgende eksperimenter udført.

1) I urinprøver, der ikke indeholder protein, ifølge pyrogallol- og sulfosalicylmetoderne (n = 43), blev humant serumalbumin tilsat ved en slutkoncentration på 0,4 g / l. Ved anvendelse af de ovennævnte metoder blev proteinkoncentrationen i de fremstillede prøver bestemt.

2) Urinprøver (n = 16) med et protein ifølge pyrogallolmetoden blev fortyndet to gange med en 0,9% natriumchloridopløsning. De opnåede prøver blev undersøgt igen ved sulfosalicylmetoden, proteinkoncentrationen blev genberegnet til fortynding.

Forskningsresultater og diskussion

En undersøgelse af urinprøver indeholdende specifikke albuminkoncentrationer viste, at den mindste detekterbare albuminkoncentration (metodefølsomhed) var 0,033 g / l for sulfosalicylmetoden og 0,012 g / l for pyrogallolmetoden.

Resultaterne af målinger i form af et diagram over sammenligneligheden af ​​resultaterne af måling af proteinindholdet i urinprøver ved hjælp af sulfosalicylsyre (ordinat akse) og pyrogallol (abscissa akse) -metoder er vist i figur 3. Den faste skrå linje på grafen svarer til målingernes målestilling ved to metoder. Hvis begge metoder gav lignende værdier, skulle punkterne på grafen være grupperet nær den faste linje. Dataene vist i fig. 3, kan vi også bemærke, at sulfosalicylmetoden konsekvent viste lavere proteinkoncentrationer i alle urinprøver sammenlignet med pyrogallolmetoden.

Som undersøgelsen viste, er der ikke nogen overbevisende statistisk forbindelse mellem resultater opnået under anvendelse af sulfosalicyl- og pyrogallol-metoder. Desuden viste sulfosalicylmetoden i sammenligning med pyrogallolmetoden i 95% urinprøver lavere værdier af proteinkoncentration. Samtidig gav måling ved sulfosalicylmetoden i 86% af tilfældene undervurderede resultater med to eller flere gange sammenlignet med pyrogallolmetoden.

Samtidig viste sulfosalicylmetoden i nogle tilfælde tilstedeværelsen af ​​protein i prøven på grund af den mørke farve eller øget turbiditet af den undersøgte urin. Det blev fastslået, at ved bestemmelse af proteinet ved sulfosalicylmetoden (prøve / reagensforholdet = 1/3) ved en bølgelængde på 595 nm kan urinprøven på grund af dets farve eller turbiditet til resultatet være fra 0 til 0,247 g / l (gennemsnitsværdi - 0,031 g / l). Det skal således erkendes, at ved anvendelse af sulfosalicylmetoden er brug af en kontrolprøve (urinprøve + saltvand) for hver urinprøve obligatorisk. Ved bestemmelse af proteinet ved pyrogallolmetoden påvirker ikke farven eller graden af ​​urinprøve urinprøven resultatet.

Forsøg på vurderingen af ​​matrixens virkning (urin) viste, at i næsten alle forberedte urinprøver indeholdende 0,4 g / l albumin var dens koncentration bestemt ved sulfosalicylmetoden under 0,4 g / l i gennemsnit med 20% (grænseværdier proteinkoncentration 0,29-0,34 g / l). På samme tid var resultaterne for alle prøver i området fra 0,40-0,46 g / l ved måling af proteinkoncentrationen i disse prøver ved pyrogallolmetoden. Ved vurderingen af ​​matricens virkning (urin) på resultaterne af måling af proteinkoncentrationen ved sulfosalicylmetoden blev det også fundet, at proteinkoncentrationen i 5 ud af 16 fortyndede urinprøver var 15-33% højere end i de tilsvarende ikke-fortyndede prøver. Til den endelige opklaring af virkningen af ​​matrixen på resultaterne af sulfosalicylmetoden er forskning på et stort antal urinprøver påkrævet.

Således indikerer de opnåede data fordelene ved pyrogallolmetoden over sulfosalicylmetoden på grund af dens højere følsomhed og ikke-modtagelighed over for interfererende faktorer, ikke behov for en blind urinprøve, muligheden for at anvende en standard til konstruktion af en kalibreringskurve og en lille mængde urin til analyse. Tilstedeværelsen af ​​sådanne egenskaber tillader os at anbefale pyrogallolmetoden til udbredt anvendelse i laboratoriepraksis.

Ud fra de opnåede data følger en konklusion: Resultaterne af måling af koncentrationen af ​​protein i urinen ved sulfosalicylmetoden er uforlignelige med resultater opnået ved pyrogallolmetoden. Denne kendsgerning er svaret på spørgsmålet - hvorfor laboratorierne i de udviklede lande ikke bruger sulfosalicylmetoden. Anvendelsen af ​​denne metode i underudviklede lande skyldes tilsyneladende det faktum, at prisfaktoren hersker over nøjagtigheden og den diagnostiske betydning af de opnåede resultater, og i betragtning af de tal, der er vist i fig. 3 resultater, det kan siges og over sund fornuft. Hvem har brug for en sådan analyse, når der ved en proteinkoncentration i urinen på 0,3 g / l målesultatet være fra 0,05 til 0,25 g / l? Hvad angår prisfaktoren, betaler du så meget, som du ved, to gange. Fejlfulde resultater af analysen fører til en fejlagtig diagnose og ineffektiv behandling af patienten. Den største fare for at anvende sulfosalicylmetoden er, at vi får signifikant undervurderede værdier og ikke sjældent savner proteinuri. Derfor kan denne metode ikke anvendes selv til screening.

Så hvad måler vi efter sulfosalicylmetoden? Metoden tilhører klassen turbidimetrisk, baseret på måling af ændringen i lystransmission (D D) af reaktionsblandingen på grund af lysfordeling (turbiditet). I tilfælde af detektering af protein i urinen dannes turbiditet på grund af følgende fremgangsmåde: molekyler af urinproteiner i et surt medium denatureres, fra en kompakt globulær form til en løs "trådformet" form. Samtidig øges konglomeratdannelsens evne kraftigt (udfældningsreaktion) i proteiner. Individuelle proteinmolekyler er mindre end det synlige lyss bølgelængde og spredes derfor meget svagt. Spredningseffektiviteten stiger dramatisk, når størrelsen af ​​de resulterende konglomerater af proteinmolekyler nærmer sig værdien på 0,6 μm (bølgelængden af ​​probinglyset). Jo større koncentration af protein i urinen er, desto større er antallet af sådanne konglomerater (spredningscentre) dannet. Imidlertid er forholdet mellem den optiske densitet D D målt på et fotometer og koncentrationen af ​​protein i urinen meget kompleks. Ved den første fase af reaktionen dannes en vis mængde små proteinpartikler, så begynder de at holde sig sammen i større partikler, mens koncentrationen af ​​spredningscentre falder, og effektiviteten (tværsnit) af spredning af hvert center øges. På et givet tidspunkt har vi i reaktionsblandingen et vist antal spredningscentre med forskellige størrelser. Ved høje koncentrationer af protein i urinen kan dannes store proteinpartikler, som udfælder, hvilket fører til et fald i reaktionsblandingens optiske densitet.

Fremgangsmåden til denaturering af proteiner og reaktionen af ​​udfældning afhænger af sammensætningen af ​​mediet, hvori de forekommer (pH, koncentration af forskellige salte). For at kalibrere metoden anvender vi en vandig opløsning af humant albumin med tilsætning af 0,9% natriumchlorid. Når vi måler koncentrationen af ​​protein i urinen, ved vi ikke og tager heller ikke hensyn til urinets pH eller dets saltpræparat. Vi tager heller ikke hensyn til, at forskellige proteiner reagerer forskelligt i sulfosalicylsyreopløsningen. Dette forklarer den store spredning af måleresultaterne vist i fig. 3. Jo tættere sammensætningen af ​​urinen til kalibratorens sammensætning, desto mere præcis måleresultatet. Der er dog meget få sådanne urinprøver. I de fleste tilfælde er urinsammensætningen sådan, at måleresultaterne er undervurderet og ofte ret betydelige.

Sidstnævnte er bekræftet af det ovenfor beskrevne forsøg, hvor proteinkoncentrationen blev målt ved sulfosalicylmetoden i ufortyndede og dobbelt fortyndede urinprøver. Sammenligning af de opnåede data viste, at fortynding af urin (under hensyntagen til fortyndingsgraden) fører til en stigning i resultaterne af målinger af proteinkoncentration med 15-33%. Denne kendsgerning bekræfter den betydelige indflydelse af urinsammensætningen på resultatet af bestemmelse af koncentrationen af ​​protein (matrixeffekt).

Hvorfor pyrogallol metode giver mulighed for at opnå mere præcise resultater af måling af koncentrationen af ​​protein i urinen? For det første på grund af den større mangfoldighed af fortynding af urinprøver i reaktionsblandingen. Hvis der i sulfosalicylmetoden er forholdet mellem urinprøve / reagens 1/3 og derefter i pyrogallolmetoden, kan det ligge i området fra 1/12,5 til 1/60 afhængigt af varianten af ​​teknikken, hvilket signifikant reducerer virkningen af ​​urinsammensætning på måleresultatet. For det andet fortsætter reaktionen i succinatpuffer, det vil sige ved en stabil pH. Og endelig, selve metoden, hvis det kan siges det, er mere gennemskueligt. Natriummolybdat og pyrogallol rødt farvestof danner et kompleks med et proteinmolekyle. Dette fører til det faktum, at farvestofmolekylerne i en fri tilstand ikke absorberer lys ved en bølgelængde på 600 nm i kombination med et protein absorbere lys. Således synes vi at markere hvert proteinmolekyle med et farvestof, og som følge heraf finder vi, at ændringen i den optiske densitet af reaktionsblandingen ved en bølgelængde på 600 nm er entydigt relateret til proteinkoncentrationen i urinen.

Som en konklusion er de væsentligste forskelle mellem sulfosalicylmetoden til bestemmelse af proteinet i urinen og fremgangsmåden under anvendelse af pyrogallol-rødfarvet præsenteret i tabel nr. 1.

Tab. Nr. 1. Sammenligningsegenskaber ved to metoder til bestemmelse af protein i urinen (sulfosalicyl- og pyrogallol-metoder)

Bestemmelse af urinprotein med pyrogallol rødt

Metodeprincippet er baseret på fotometrisk måling af den optiske densitet af en opløsning af et farvet kompleks dannet ved interaktionen mellem proteinmolekyler med molekyler i det pyrogallol-røde farvestofkompleks og natriummolybdat (Pyrogallol Red-Molybdate-kompleks) i et surt medium. Farveintensiteten af ​​opløsningen er proportional med proteinindholdet i det undersøgte materiale. Tilstedeværelsen af ​​detergenter i reagenset giver en ækvivalent definition af proteiner af forskellig art og struktur.

Reagenser. 1) 1,5 mmol / l opløsning af pyrogallolrød (PGA): 60 mg PGA opløses i 100 ml methanol. Opbevares ved temperatur 0-5 ° С; 2) 50 mmol / 1 succinatpufferopløsning pH 2,5: 5,9 g ravsyre (HOOC-CH₂CH₂-COOH); 0,14 g natriumoxalat (Na₂C₂O₄) og 0,5 g natriumbenzoat (C₆H₅COONa) opløses i 900 ml destilleret vand; 3) 10 mmol / l opløsning af natriummolybdat-krystallhydrat (Na₂MoO₄ × 2H₂O): 240 mg natriummolybdat opløses i 100 ml destilleret vand; 4) Arbejdsreagens: Til 900 ml succinatpufferopløsning tilsættes 40 ml af opløsningen af ​​PHC og 4 ml natriummolybdatopløsning. Opløsningens pH justeres til 2,5 med en 0,1 mol / l opløsning af saltsyre (HCI), og dens volumen justeres til 1 liter. Reagenset i denne form er klar til brug og er stabilt ved opbevaring på et mørkt sted og ved en temperatur på 2-25 ° C i 6 måneder; 5) 0,5 g / l standard albuminopløsning.

Forløbet af beslutsomhed. 0,05 ml af den undersøgte urin indføres i det første reagensglas, der tilsættes 0,05 ml albuminstandardopløsning til det andet reagensglas og 0,05 ml destilleret vand til det tredje reagensglas (kontrolprøve), hvorefter der tilsættes 3 ml arbejdsreagens til disse reagensglas. Indholdet af rørene blandes, og efter 10 minutter fotograferes prøven og standarden mod en kontrolprøve ved en bølgelængde på 596 nm i en kuvette med en optisk sti længde på 10 mm.

Beregningen af ​​koncentrationen af ​​protein i den analyserede urinprøve udføres ifølge formlen:

hvor C er proteinkoncentrationen i den analyserede urinprøve, g / l; En_etc. og a_artikel- udryddelse af den undersøgte urinprøve og standard albuminopløsning, g / l; 0,5 - koncentration af standard albuminopløsning, g / l.

• opløsningens farve (farvekompleks) er stabil i en time;
• direkte proportionalt forhold mellem koncentrationen af ​​protein i prøven og opløsningens absorption afhænger af typen af ​​fotometer;
• Når proteinindholdet i urinen er over 3 g / l fortyndes prøven med isotonisk natriumchloridopløsning (9 g / l), og bestemmelsen gentages. Graden af ​​fortynding tages i betragtning ved bestemmelse af proteinkoncentrationen.

Vi behandler leveren

Behandling, symptomer, medicin

Pyrogallol rød bestemmelse af protein i urinen

26.02.2009

Kurilyak O.A., Ph.D.

Normalt udskilles proteinet i urinen i en relativt lille mængde, sædvanligvis ikke mere end 100-150 mg / dag.

Daglig diurese hos en sund person er 1000-1500 ml / dag; proteinkoncentrationen under fysiologiske betingelser er således 8-10 mg / dl (0,08-0,1 g / l).

Total urinprotein er repræsenteret af tre hovedfraktioner - albumin, mucoproteiner og globuliner.

Urinalbumin er den del af serumalbumin, der er filtreret i glomeruli og ikke blevet reabsorberet i nyretubuli; Ved normal udskillelse af albumin i urinen er mindre end 30 mg / dag. En anden vigtig kilde til protein i urinen er nyretubuli, især den distale del af tubuli. Disse tubuli udskiller to tredjedele af den totale mængde af urinprotein; af dette beløb er ca. 50% repræsenteret af Tamm-Horsfall-glycoproteinet, som udskilles af epitelet af de distale tubuli og spiller en vigtig rolle i dannelsen af ​​urinsten. Andre proteiner er til stede i urinen i små mængder og kommer fra lavmolekylære plasmaproteiner filtreret gennem nyretilfiltret, som ikke reabsorberes i nyretubuli, mikroglobuliner fra epitelet af nyretubuli (RTE), såvel som prostatisk og vaginal udledning.

Proteinuri, det vil sige en stigning i proteinindholdet i urinen er et af de mest signifikante symptomer, hvilket afspejler nyreskade. Dog kan en række andre tilstande også ledsages af proteinuri. Derfor er der to hovedgrupper af proteinuri: renal (ægte) og extrarenal (falsk) proteinuri.

I renal proteinuri kommer proteinet i urinen direkte fra blodet på grund af en stigning i permeabiliteten af ​​glomerulærfiltret. Renal proteinuri findes ofte i glomerulonefritis, nefrose, pyelonefritis, nefrosclerose, nyreamyloidose, forskellige former for nefropati, for eksempel graviditetsnegropati, feber, hypertension osv. Proteinuri kan også findes hos raske mennesker efter alvorlig fysisk anstrengelse, hypotermi og psykologisk stress. I nyfødte observeres fysiologisk proteinuri i de første uger af livet, og når astheni forekommer hos børn og unge, er ortostatisk proteinuri (i opretstående stilling af kroppen) mulig i kombination med hurtig vækst mellem 7 og 18 år.

I tilfælde af falsk (extrarenal) proteinuri er kilden til protein i urinen en blanding af leukocytter, erytrocytter, epithelceller i urinvejen urothelia. Nedbrydningen af ​​disse elementer, især udtalt med alkalisk urin, fører til indtrængen af ​​protein i urinen, som allerede har passeret nyretilfiltret. Særligt høj grad af falsk proteinuri giver blod i urinen, med kraftig hæmaturi, den kan nå 30 g / l og mere. Sygdomme, der kan ledsages af extrarenal proteinuria - urolithiasis, nyre tuberkulose, nyrer eller urinvejs tumorer, cystitis, pyelitis, prostatitis, urethritis, vulvovaginitis.

Klinisk klassificering omfatter mild proteinuri (mindre end 0,5 g / dag.), Moderat (fra 0,5 til 4 g / dag.), Eller svær (mere end 4 g / dag.).

De fleste patienter med nyresygdom, såsom akut glomerulonefrit eller pyelonefrit, afslører moderat proteinuri, men patienter med nefrotisk syndrom udskiller normalt mere end 4 g protein i urinen dagligt.

Til den kvantitative bestemmelse af protein anvendes en bred vifte af metoder, især den samlede Brandberg-Roberts-Stolnikov-metode, biuretmetoden, sulfosalicylsyremetoden, metoderne under anvendelse af Coomassie-blåfarvestof, pyrogallol-rødfarve osv.

Anvendelsen af ​​forskellige metoder til bestemmelse af protein i urinen har medført en alvorlig forvirring i fortolkningen af ​​grænserne for normen for proteinindhold i urinen. Da 2 metoder anvendes mest i laboratorier - med sulfosalicylsyre og pyrogallol rødt farvestof, betragter vi problemet med korrektheden af ​​grænserne for normerne for dem. Ud fra sulfosalicylmetoden i normal urin bør proteinindholdet ikke overstige 0,03 g / l, og fra pyrogallols synspunkt, 0,1 g / l! Forskellene er tredobbelte.

Lavtværdier af den normale koncentration af proteiner i urinen, når der anvendes sulfosalicylsyre på grund af følgende punkter:

• Kalibreringskurven er baseret på en vandig opløsning af albumin. Urin i dets sammensætning er meget forskellig fra vand: pH, salt, forbindelser med lav molekylvægt (kreatinin, urinstof osv.). Som følge heraf kan ifølge Altshuler, Rakov og Tkachev en fejl ved bestemmelse af urinprotein være 3 gange eller mere! dvs. korrekte resultater kan kun opnås i tilfælde, hvor urinen har en meget lav specifik gravitation, og dens sammensætning og pH nærmer sig vand;
• den højere følsomhed af sulfosalicylmetoden til albumin i sammenligning med andre proteiner (på det tidspunkt som nævnt ovenfor er albumin i normale urinprøver ikke mere end 30% af det samlede urinprotein);
• hvis urin-pH-værdien skiftes til den alkaliske side, neutraliseres sulfosalicylsyre, hvilket også medfører et fald i resultaterne af proteinbestemmelse;
• sedimenteringshastigheden af ​​bundfald er underlagt væsentlig variation - ved lave proteinkoncentrationer sænkes nedbøringen, og tidlig afslutning af reaktionen fører til en undervurdering af resultatet;
• hastigheden af ​​udfældningsreaktion afhænger i det væsentlige af blanding af reaktionsblandingen. Ved høje koncentrationer af protein kan kraftig rystning af røret føre til dannelse af store flager og deres hurtige udfældning.

Alle de ovenfor angivne træk ved fremgangsmåden fører til en signifikant undervurdering af proteinkoncentrationen bestemt i urinen. Graden af ​​underrapportering afhænger stærkt af sammensætningen af ​​en bestemt urinprøve. Da metoden for sulfosalicylsyre giver en undervurderet værdi af proteinkoncentration, er den normale grænse for denne metode også 0,03 g / l, ca. tre gange for lav i sammenligning med dataene givet i udenlandske referencebøger om klinisk laboratoriediagnostik.

Langt de fleste laboratorier i vestlige lande har opgivet anvendelsen af ​​sulfosalicylmetoden til bestemmelse af koncentrationen af ​​protein i urinen og aktivt brug pyrogallolmetoden til dette formål. Pyrogallolmetoden til bestemmelse af proteinkoncentrationen i urin og andre biologiske væsker er baseret på det fotometriske princip for måling af den optiske densitet af et farvet kompleks dannet ved interaktionen mellem proteinmolekyler med pyrogallol rødt farvestof og natriummolybdatkompleksmolekyler (Pyrogallol Red-Molybdate-kompleks).

Hvorfor pyrogallol metode giver mulighed for at opnå mere præcise resultater af måling af koncentrationen af ​​protein i urinen? For det første på grund af den større mangfoldighed af fortynding af urinprøver i reaktionsblandingen. Hvis der i sulfosalicylmetoden er forholdet mellem urinprøve / reagens 1/3 og derefter i pyrogallolmetoden, kan det ligge i området fra 1/12,5 til 1/60 afhængigt af varianten af ​​teknikken, hvilket signifikant reducerer virkningen af ​​urinsammensætning på måleresultatet. For det andet fortsætter reaktionen i succinatpuffer, det vil sige ved en stabil pH. Og endelig kan selve princippet om metoden siges at være mere "gennemsigtig". Natriummolybdat og pyrogallol rødt farvestof danner et kompleks med et proteinmolekyle. Dette fører til, at farvestofmolekylerne i fri tilstand ikke absorberer lys ved en bølgelængde på 600 nm i kombination med et proteinabsorberende lys. Således synes vi at markere hvert proteinmolekyle med et farvestof, og som følge heraf ser vi, at ændringen i den optiske densitet af reaktionsblandingen ved en bølgelængde på 600 nm klart korrelerer med proteinkoncentrationen i urinen. Da affiniteten af ​​pyrogallol rødt til forskellige proteinfraktioner er næsten det samme, tillader metoden at bestemme det samlede urinprotein. Derfor er grænsen for normale værdier for proteinkoncentration i urinen 0,1 g / l (det er angivet i alle moderne vestlige retningslinjer for klinisk og laboratoriediagnostik, herunder Clinical Manual for Laboratory Tests, redigeret af N. Tits). Sammenligningsegenskaber ved pyrogallol og sulfosalicylmetoder til bestemmelse af urinprotein er vist i tabel 1.

Afslutningsvis vil jeg gerne endnu en gang fokusere på det faktum, at når laboratoriet går fra sulfosalicylmetoden til bestemmelse af urinprotein til pyrogallolmetoden, øges grænsen for normale værdier betydeligt (fra 0,03 g / l til 0,1 g / l!). Dette laboratoriepersonale bør helt sikkert underrette klinikere, fordi I denne situation kan diagnosen proteinuri kun foretages, hvis proteinindholdet i urinen overstiger 0,1 g / l.

3. Bestemmelse af protein.

Metodeprincippet baseret på koagulering af protein i urinen i nærværelse af salpetersyre (eller 20% opløsning af sulfosalicylsyre).

Arbejdsproces: Til 5 dråber urin tilsættes 1-2 dråber salpetersyre (eller sulfosalicylsyre). I nærvær af protein i urinen fremstår uklarhed.

Tabel. Påvisning af patologiske komponenter i urinen.

Bemærk: I nærvær af glucose og protein i den undersøgte urin bestemmes deres kvantitative indhold.

Kvantitativ bestemmelse af protein i urinen ved den kolorimetriske metode med pyrogallolrød.

Metodeprincippet: Når protein interagerer med pyrogallol rødt og natriummolybdat, dannes et farvet kompleks, farveintensiteten, som er proportional med koncentrationen af ​​protein i prøven.

reagenser: Arbejdsreagens - pyrogallol rød opløsning i succinatbuffer, kalibreringsproteinopløsning med en koncentration på 0,50 g / l

Prøver blandes, hold i 10 minutter. ved stuetemperatur (18-25 ° C). Måling af optisk densitet oplevet (D_op) og kalibreringsprøve (D_til) mod kontrolprøven ved A = 598 (578-610) nm. Farvning er stabil i 1 time.

beregning: koncentrationen af ​​protein i urinen (C) g / l beregnes med formlen:

Normale værdier: op til 0,094 g / l, (0,141 g / dag)

Kvantitativ bestemmelse af glucose i urinen ved glucoseoxidase-metoden.

Metodeprincippet: Når D-glucose oxideres af atmosfærisk oxygen under virkningen af ​​glucoseoxidase, dannes en ækvimolær mængde hydrogenperoxid. Under virkningen af ​​peroxidase oxiderer hydrogenperoxid kromogene substrater (en blanding af phenol og 4 aminoantipirin - 4AAP) med dannelsen af ​​et farvet produkt. Farvens intensitet er proportional med glukoseindholdet.

2 N₂Oh₂ + phenol + 4AA-farvet stof + 4N₂Oh

Arbejdsproces: 1 ml af arbejdsløsningen og 0,5 ml phosphatpuffer indføres i to rør. 0,02 ml urin tilsættes til det første rør, og 0,02 ml kalibrator sættes til den anden (kalibreringsglucosestandardopløsning, 10 mmol / l). Prøverne blandes, inkuberes i 15 minutter ved en temperatur på 37 ° C i en termostat, og den optiske densitet måles ved eksperimentelle (D_op) og kalibrering (D_til) prøver mod arbejdsreagenset ved en bølgelængde på 500-546 nm.

Indholdet af glukose i daglig urin bestemmes af mmol / dag ved at multiplicere resultatet opnået ved mængden af ​​urin indsamlet pr. Dag.

Bemærk. Når sukkerindholdet i urinen mere end 1% skal fortyndes.

I øjeblikket anvender biokemiske laboratorier en samlet ekspresmetode til analyse af urin til glukose ved brug af reaktiv glucose-testglucosetest eller ved anvendelse af kombinerede teststrimler til pH, protein, glukose, ketonlegemer og blod. Teststrimler, nedsænket i et kar med urin i 1 sekund. og sammenlign farven på skalaen.

Lægehepatitis

leverbehandling

Norm protein i urin pyrogallol metode

En sund person producerer 1,0-1,5 liter urin om dagen. Et indhold på 8-10 mg / dl protein i det er et fysiologisk fænomen. Det daglige indtag af protein i urinen 100-150 mg bør ikke forårsage mistanker. Globulin, mucoprotein og albumin er hvad der smelter i alt protein i urinen. Et stort albuminudløb indikerer en overtrædelse af filtreringsprocessen i nyrerne og kaldes proteinuri eller albuminuri.

Hvert stof i urinen får en "sund" hastighed, og hvis proteinindekset svinger, kan dette indikere en narkotikapatiologi.

Urinalyse indebærer brugen af ​​enten den første (morgen) del eller tage en daglig prøve. Sidstnævnte foretrækker at vurdere proteinuriens niveau, da proteinindholdet har udtalt daglige udsving. Urin i løbet af dagen samles i en beholder, måler det samlede volumen. For et laboratorium, der udfører urinproteinanalyse, er en standardprøve (fra 50 til 100 ml) fra denne beholder tilstrækkelig, og det resterende antal er ikke påkrævet. For mere information udføres en ekstra test på Zimnitsky, som viser, om urinindikatorerne pr. Dag er normale.

Tilbage til indholdsfortegnelsen

Proteinet i urinen er normalt hos en voksen bør ikke overstige 0,033 g / l. Samtidig er dagsrenten ikke højere end 0,05 g / l. For gravide kvinder er proteinhastigheden i daglig urin mere - 0,3 g / l. Og om morgenen er urinen den samme - 0,033 g / l. Proteinstandarder er forskellige i den generelle analyse af urin og hos børn: 0,036 g / l for morgendelen og 0,06 g / l pr. Dag. Oftest foretager laboratorierne en analyse ved hjælp af to metoder, der viser, hvor meget proteinfraktion er indeholdt i urinen. Ovennævnte normale værdier er gyldige for analysen udført med sulfosalicylsyre. Hvis pyrogallol rødfarvestof blev anvendt, vil værdierne være tre gange forskellige.

Tilbage til indholdsfortegnelsen

Årsagen til proteinet i urinen kan være patologiske processer i nyrerne:

• filtrering i renal glomeruli går den forkerte måde;
• absorption i proteinrør er svækket;
• Nogle sygdomme har en stærk belastning på nyrerne - når proteinet i blodet er forhøjet, har nyrerne tritivt "ikke tid" til at filtrere det.

De resterende grunde betragtes som ikke-nyre. Sådan udvikler funktionel albuminuri. Proteinet i analysen af ​​urin fremkommer ved allergiske reaktioner, epilepsi, hjertesvigt, leukæmi, forgiftning, myelom, kemoterapi, systemiske sygdomme. Denne indikator i patientanalyser er oftest den første klokke af hypertensive sygdomme.

En stigning i urinprotein kan skyldes faktorer med en ikke-patologisk karakter, så yderligere analyser vil være nødvendige. Tilbage til indholdsfortegnelsen

Kvantitative metoder til bestemmelse af protein i urinen giver fejl, derfor anbefales det at udføre flere analyser, og derefter bruge formlen til at beregne den korrekte værdi. Urinproteinindholdet måles i g / l eller mg / l. Disse indikatorer for protein gør det muligt at bestemme proteinuriens niveau, foreslå en grund, evaluere prognosen og bestemme strategien.

Tilbage til indholdsfortegnelsen

For hele kroppens funktion kræver en konstant udveksling mellem blod og væv. Det er kun muligt, hvis der er et vist osmotisk tryk i blodkarrene. Blodplasmaproteiner opretholder bare et sådant trykniveau, når lavmolekylære stoffer let passerer fra mediet med deres høje koncentration til mediet med den lavere koncentration. Tabet af proteinmolekyler fører til frigivelse af blod fra sin seng i vævet, hvilket er fyldt med stærkt ødem. Dette er manifestationen af ​​moderat og svær proteinuri.

De første trin i albuminuri er asymptomatiske. Patienten lægger kun vægt på manifestationerne af den underliggende sygdom, som er årsagen til protein i urinen.

Sporproteinuri kaldes en stigning i proteinindholdet i urinen på grund af brugen af ​​visse produkter. Tilbage til indholdsfortegnelsen

Urin til analyse opsamles i en ren, skummet beholder. Før du opsamler toilettet, vises perineum, skal du vaske med sæbe og vand. Kvinder rådes til at lukke vagina med et stykke bomuld eller en tampon, så vaginale udladninger ikke påvirker resultatet. På aftenen er det bedre ikke at drikke alkohol, mineralvand, kaffe, krydret, salt og mad, der giver urin en farve (blåbær, rødbeter). Stærk fysisk anstrengelse, lang gang, stress, feber og svedtendens, overdreven forbrug af proteinfødevarer eller stoffer før urin fremkalder proteinets udseende i urinanalysen af ​​en helt sund person. Dette tilladte fænomen kaldes sporproteinuri.

Tilbage til indholdsfortegnelsen

Nyresygdom, der fører til tab af protein:

• Amyloidose. Normale celler i nyrerne erstattes af amyloider (protein-saccharidkompleks), som forhindrer kroppen i at arbejde normalt. Ved proteinurisk fase deponeres amyloider i nyrene i nyrerne, ødelægger nephronen og som følge heraf nyretilfiltret. Så proteinet kommer fra blodet ind i urinen. Denne fase kan vare mere end 10 år.
• Diabetisk nefropati. På grund af forkert metabolisme af kulhydrater og lipider ødelægges blodkar, glomeruli og tubuli i nyrerne. Protein i urinen er det første tegn på en forudsagt komplikation af diabetes.
• Sygdomme af inflammatorisk genese - nefritis. Ofte påvirker læsioner blodkarrene, glomeruli og pyelocaliceale systemer, der forstyrrer det normale forløb af filtreringssystemet.
• Glomerulonefritis er i de fleste tilfælde af autoimmun natur. Patienten klager over et fald i mængden af ​​urin, lændesmerter og en stigning i tryk. Til behandling af glomerulonefritis anbefales diæt, diæt og lægemiddelbehandling.
• Pyelonefritis. I den akutte periode forekommer symptomer på bakteriel infektion: kuldegysninger, kvalme, hovedpine. Dette er en smitsom sygdom.
• Polycystisk nyresygdom.

I en sund krop er proteinmolekyler (og de er ret store i størrelse) ikke i stand til at passere gennem nyrernes filtreringssystem. Derfor bør protein i urinen ikke være. Denne indikator er den samme for både mænd og kvinder. Hvis analysen indikerer proteinuri, er det vigtigt at konsultere en læge af grunde. Specialisten vil estimere, hvor meget proteinniveauet er forhøjet, om der er en sammenhængende patologi, hvordan man genopretter kroppens normale funktion. Ifølge statistikker har kvinder en højere risiko for urogenital sygdom end mænd.

Metodeprincippet baseret på koagulering af protein i urinen i nærværelse af salpetersyre (eller 20% opløsning af sulfosalicylsyre).

Arbejdsproces: Til 5 dråber urin tilsættes 1-2 dråber salpetersyre (eller sulfosalicylsyre). I nærvær af protein i urinen fremstår uklarhed.

Tabel. Påvisning af patologiske komponenter i urinen.

Bemærk: I nærvær af glucose og protein i den undersøgte urin bestemmes deres kvantitative indhold.

Metodeprincippet: Når protein interagerer med pyrogallol rødt og natriummolybdat, dannes et farvet kompleks, farveintensiteten, som er proportional med koncentrationen af ​​protein i prøven.

reagenser: Arbejdsreagens - pyrogallol rød opløsning i succinatbuffer, kalibreringsproteinopløsning med en koncentration på 0,50 g / l

Prøver blandes, hold i 10 minutter. ved stuetemperatur (18-25 ° C). Mål den optiske densitet af den eksperimentelle (Dop) og kalibreringsprøve (Dk) mod kontrolprøven ved A = 598 (578-610) nm. Farvning er stabil i 1 time.

beregning: koncentrationen af ​​protein i urinen (C) g / l beregnes med formlen:

hvor: Dop = Dk = C = g / l.

Normale værdier: op til 0,094 g / l, (0,141 g / dag)

Metodeprincippet: Når D-glucose oxideres af atmosfærisk oxygen under virkningen af ​​glucoseoxidase, dannes en ækvimolær mængde hydrogenperoxid. Under virkningen af ​​peroxidase oxiderer hydrogenperoxid kromogene substrater (en blanding af phenol og 4 aminoantipirin - 4AAP) med dannelsen af ​​et farvet produkt. Farvens intensitet er proportional med glukoseindholdet.

Glucose + O2 + H2O gluconolacton + H2O2

2H2O2 + phenol + 4AAP farvet forbindelse + 4H20

Arbejdsproces: 1 ml af arbejdsløsningen og 0,5 ml phosphatpuffer indføres i to rør. 0,02 ml urin tilsættes til det første rør, og 0,02 ml kalibrator sættes til den anden (kalibreringsglucosestandardopløsning, 10 mmol / l). Prøverne blandes, inkuberes i 15 minutter ved en temperatur på 37 ° C i en termostat, og den optiske densitet af de eksperimentelle (Dop) og kalibrerings (Dk) prøver mod arbejdsreagenset måles ved en bølgelængde på 500-546 nm.

Beregning: C = Dop / Dk  10 mmol / l Dop = Dk =

Indholdet af glukose i daglig urin bestemmes af mmol / dag ved at multiplicere resultatet opnået ved mængden af ​​urin indsamlet pr. Dag.

Bemærk. Når sukkerindholdet i urinen mere end 1% skal fortyndes.

I øjeblikket anvender biokemiske laboratorier en samlet ekspresmetode til analyse af urin til glukose ved brug af reaktiv glucose-testglucosetest eller ved anvendelse af kombinerede teststrimler til pH, protein, glukose, ketonlegemer og blod. Teststrimler, nedsænket i et kar med urin i 1 sekund. og sammenlign farven på skalaen.

Bestemmelse af protein ved anvendelse af pyrogallol rød indikator

Metodeprincippet er baseret på fotometrisk måling af den optiske densitet af en opløsning af et farvet kompleks dannet ved interaktionen mellem proteinmolekyler med molekyler i det pyrogallol-røde farvestofkompleks og natriummolybdat (Pyrogallol Red-Molybdate-kompleks) i et surt medium. Farveintensiteten af ​​opløsningen er proportional med proteinindholdet i det undersøgte materiale. Tilstedeværelsen af ​​detergenter i reagenset giver en ækvivalent definition af proteiner af forskellig art og struktur.

Reagenser. 1) 1,5 mmol / l opløsning af pyrogallolrød (PGA): 60 mg PGA opløses i 100 ml methanol. Opbevares ved temperatur 0-5 ° С; 2) 50 mmol / 1 succinatpufferopløsning pH 2,5: 5,9 g ravsyre (HOOC-CH2-CH2-COOH); 0,14 g natriumoxalat (Na2C204) og 0,5 g natriumbenzoat (C6H5COONa) opløses i 900 ml destilleret vand; 3) 10 mmol / l natriummolybdat-krystalhydratopløsning (Na2MoO4x 2H2O): 240 mg natriummolybdat opløses i 100 ml destilleret vand; 4) Arbejdsreagens: Til 900 ml succinatpufferopløsning tilsættes 40 ml af opløsningen af ​​PHC og 4 ml natriummolybdatopløsning. Opløsningens pH justeres til 2,5 med en 0,1 mol / l opløsning af saltsyre (HCI), og dens volumen justeres til 1 liter. Reagenset i denne form er klar til brug og er stabilt ved opbevaring på et mørkt sted og ved en temperatur på 2-25 ° C i 6 måneder; 5) 0,5 g / l standard albuminopløsning.

Forløbet af beslutsomhed. 0,05 ml af den undersøgte urin indføres i det første reagensglas, der tilsættes 0,05 ml albuminstandardopløsning til det andet reagensglas og 0,05 ml destilleret vand til det tredje reagensglas (kontrolprøve), hvorefter der tilsættes 3 ml arbejdsreagens til disse reagensglas. Indholdet af rørene blandes, og efter 10 minutter fotograferes prøven og standarden mod en kontrolprøve ved en bølgelængde på 596 nm i en kuvette med en optisk sti længde på 10 mm.

Beregningen af ​​koncentrationen af ​​protein i den analyserede urinprøve udføres ifølge formlen:

C = 0,5 × apr / ast,

hvor C er proteinkoncentrationen i den analyserede urinprøve, g / l; Apr og ast - udryddelse af den undersøgte urinprøve og standard albuminopløsning, g / l; 0,5 - koncentration af standard albuminopløsning, g / l.

• opløsningens farve (farvekompleks) er stabil i en time;
• direkte proportionalt forhold mellem koncentrationen af ​​protein i prøven og opløsningens absorption afhænger af typen af ​​fotometer;
• Når proteinindholdet i urinen er over 3 g / l fortyndes prøven med isotonisk natriumchloridopløsning (9 g / l), og bestemmelsen gentages. Graden af ​​fortynding tages i betragtning ved bestemmelse af proteinkoncentrationen.

• Bestemmelse af urinprotein
• Unified Sulfosalicylic Acid Trial
• Den Unified Brandberg - Roberts - Stolnikov Metode
• Bestemmelse af mængden af ​​protein i urinen ved omsætning med sulfosalicylsyre
• Biuret metode
• Påvisning i urinen af ​​Bens - Jones protein

Proteinuri er et fænomen, hvor der opdages protein i urinen, hvilket indikerer muligheden for nyreskader og er en faktor i udviklingen af ​​hjerte-, blod- og lymfesygdomme.

Detektion af protein i urinen indikerer ikke altid en sygdom. Et lignende fænomen er typisk selv for absolut sunde mennesker, i hvis urinprotein kan detekteres. Hypotermi, fysisk anstrengelse, forbrug af proteinfødevarer medfører udseende af protein i urinen, som forsvinder uden nogen behandling.

På screeningstidspunktet bestemmer 17% af praktisk sunde mennesker protein, men kun 2% af dette antal mennesker viser et positivt testresultat som tegn på nyresygdom.

Proteinmolekyler bør ikke komme ind i blodet. De er afgørende for kroppen - de er et byggemateriale til celler, deltager i reaktioner som coenzymer, hormoner, antistoffer. Hos både mænd og kvinder er hastigheden den fuldstændige mangel på protein i urinen.

Funktionen med at forhindre tab af proteinmolekyler af kroppen udføres af nyrerne.

To nyresystemer er involveret i filtrering af urin:

1. glomeruli - lad ikke store molekyler ind, men hold ikke albumin, globuliner - en lille del af proteinmolekylerne;
2. nyretubuli - adsorberende proteiner filtrerede glomeruli, vende tilbage til kredsløbssystemet.

Albumin (ca. 49%), mucoproteiner, globuliner findes i urinen, hvorom andel af immunglobuliner udgør ca. 20%.

Globuliner - valleproteiner med høj molekylvægt, som produceres i immunsystemet og leveren. De fleste af dem syntetiseres af immunsystemet, refererer til immunoglobuliner eller antistoffer.

Albuminer er en brøkdel af proteiner, der først vises i urinen selv med mindre nyreskade. Der er en vis mængde albumin i sund urin, men det er så ubetydeligt, at det ikke kan detekteres ved hjælp af laboratoriediagnostik.

Den lavere tærskel, der kan detekteres ved hjælp af laboratoriediagnostik er 0,033 g / l. Hvis mere end 150 mg protein går tabt om dagen, taler de om proteinuri.

Grundlæggende urinprotein data

Sygdommen med mild proteinuri er asymptomatisk. Visuelt kan proteinfri urin ikke skelnes fra urin, hvor der er en lille mængde protein. Noget skumholdig urin bliver allerede med en høj grad af proteinuri.

Det er muligt at påtage sig en aktiv udskillelse af protein i urinen ved patientens udseende kun med en moderat eller alvorlig grad af sygdommen som følge af udseende af ødem i lemmer, ansigt, mave.

I de tidlige stadier af sygdommen kan følgende være indirekte tegn på proteinuri:

• urin misfarvning;
• stigende svaghed;
• mangel på appetit
• kvalme, opkastning;
• knoglesmerter;
• døsighed, svimmelhed
• forhøjet temperatur.

Udseendet af sådanne tegn kan ikke ignoreres, især under graviditeten. Dette kan betyde en lille afvigelse fra normen, og kan være et symptom på udvikling af præeklampsi, præeklampsi.

Kvantificering af tabet af protein er ikke en nem opgave; for at opnå et mere fuldstændigt billede af patientens tilstand anvendes flere laboratorietest.

Vanskeligheder ved at vælge en metode til påvisning af overskydende protein i urinen forklares ved:

• lavproteinkoncentration, for hvilken anerkendelse kræver højpræcisionsinstrumenter;
• sammensætning af urin, komplicerer opgaven, da den indeholder stoffer, der forvrider resultatet.

Den største information fremgår af analysen af ​​den første morgen del af urinen, som opsamles efter at være vågnet.

På tærsklen til analysen skal følgende betingelser være opfyldt:

• Spis ikke krydret, stegt, proteinfødevarer, alkohol;
• udelukke vanddrivende i 48 timer;
• begrænse fysisk aktivitet
• følg grundigt reglerne om personlig hygiejne.

Morgen urin er den mest informative, da den er langvarig i blæren, mindre afhængig af fødeindtagelse.

Mængden af ​​protein i urinen kan analyseres ved tilfældig del, som tages til enhver tid, men denne analyse er mindre informativ, jo højere er sandsynligheden for fejl.

For at kvantificere dagligt proteinabsorption foretages en analyse af den samlede daglige urin. For at gøre dette, inden for 24 timer indsamlet i en speciel plastikbeholder, blev hele urinen allokeret til dagen. Du kan begynde at indsamle når som helst. Hovedbetingelsen - præcis dagen for indsamling.

Den kvalitative definition af proteinuri er baseret på denaturering af proteinet ved fysiske eller kemiske faktorer. Kvalitative metoder vedrører screening, hvilket gør det muligt at fastslå tilstedeværelsen af ​​protein i urinen, men ikke give mulighed for nøjagtigt at vurdere graden af ​​proteinuri.

Brugte prøver:

• med kogning;
• sulfosalicylsyre;
• salpetersyre, reagens Larionic ved Heller-ringprøven.

En prøve med sulfosalicylsyre udføres ved sammenligning af en kontrol urinprøve med en erfaren, hvor 7-8 dråber 20% sulfosalicylsyre tilsættes til urinen. Konklusionen om tilstedeværelsen af ​​proteinet fremstilles i overensstemmelse med intensiteten af ​​den opalescerende turbiditet, der fremkommer i testrøret under reaktionen.

Mere almindeligt anvendt Geller test med 50% salpetersyre. Metodens følsomhed er 0,033 g / l. Med en sådan koncentration af protein i et reagensglas med en urinprøve og reagens i 2-3 minutter efter forsøgets start vises en hvid trådring, hvis dannelse indikerer tilstedeværelsen af ​​protein.

Semikvantitative metoder omfatter:

• Metode til bestemmelse af protein i urinteststrimler
• Brandberg-Roberts-Stolnikov metode.

Metoden til bestemmelse ifølge Brandberg-Roberts-Stolnikov-metoden er baseret på Geller-ringmetoden, men tillader en til mere præcist at estimere mængden af ​​protein. Ved udførelse af en test ved anvendelse af denne teknik opnår adskillige fortyndinger af urin udseendet af en trådlignende proteinring i tidsintervallet mellem 2-3 minutter fra testens begyndelse.

I praksis anvendes teststrimmelmetoden med det påførte farvestofbromphenolblåt som indikator. Ulempen ved teststrimler er selektiv følsomhed over for albumin, hvilket fører til en forvrængning af resultatet i tilfælde af en stigning i urinkoncentrationen af ​​globuliner eller andre proteiner.

Ulemperne ved fremgangsmåden er også relativt lav følsomhed af testen til proteinet. Teststrimlerne begynder at reagere på tilstedeværelsen af ​​protein i urinen ved en proteinkoncentration større end 0,15 g / l.

Kvantitative vurderingsmetoder kan opdeles betinget i:

Metoder er baseret på proteinernes egenskab for at reducere opløseligheden under virkningen af ​​et bindemiddel med dannelsen af ​​en dårligt opløselig forbindelse.

Agenter, der forårsager proteinbinding, kan være:

• sulfosalicylsyre;
• trichloreddikesyre;
• benzethoniumchlorid.

På resultaterne af testene trækkes konklusioner baseret på graden af ​​dæmpning af lysflussen i prøven med suspension sammenlignet med kontrollen. Resultaterne af denne metode kan ikke altid tilskrives pålidelige på grund af forskellene i betingelserne for: hastigheden af ​​blanding af reaktanterne, temperaturen, surhedsgraden af ​​mediet.

Effekten på evalueringen af ​​indtagelse af medicin dagen før, før test udføres ved hjælp af disse metoder, kan ikke tages:

• antibiotika;
• sulfonamider;
• jodholdige lægemidler.

Metoden henviser til tilgængelig til kostpris, hvilket gør det muligt at anvende det i vid udstrækning til screening. Men mere præcise resultater kan opnås ved at bruge dyrere kolorimetriske teknikker.

Følsomme metoder, der præcist bestemmer koncentrationen af ​​protein i urinen, indbefatter kolorimetriske metoder.

Du kan gøre det med høj præcision:

• biuret reaktion;
• teknik Lowry;
• Farvestyringsteknikker, der bruger farvestoffer, der danner komplekser med urinproteiner, der adskiller sig fra prøven visuelt.

Colorimetriske metoder til påvisning af protein i urinen

Metoden refererer til en pålidelig, meget følsom, der gør det muligt at bestemme i urinalbuminet, globuliner, paraproteiner. Den bruges som den vigtigste metode til at afklare kontroversielle testresultater såvel som det daglige urinprotein hos patienter med nephrologiske afdelinger på hospitaler.

Endnu mere præcise resultater kan opnås ved Lowry-metoden, som er baseret på biuretreaktionen, såvel som Folin-reaktionen, som genkender tryptophan og tyrosin i proteinmolekyler.

For at eliminere mulige fejl renses urinprøven ved dialyse fra aminosyrer, urinsyre. Der er fejl ved anvendelse af salicylater, tetracycliner, chlorpromazin.

Den mest præcise metode til bestemmelse af et protein er baseret på dets egenskab for at binde til de farvestoffer, som anvendes:

• Ponceau;
• Coomassie brilliant blue;
• pyrogallisk rød.

I løbet af dagen varierer mængden af ​​protein udskilt i urinen. For mere objektivt at vurdere tabet af protein i urinen, introducere begrebet dagligt protein i urinen. Denne værdi måles i g / dag.

For en hurtig vurdering af det daglige protein i urinen bestemmes mængden af ​​protein og kreatinin i en enkelt del af urinen, så trækkes et protein / kreatininforhold fra proteintabet om dagen ved forholdet.

Metoden er baseret på, at hastigheden af ​​udskillelse af urin kreatinin er konstant, ændrer sig ikke om dagen. I en sund person er det normale forhold mellem protein: kreatinin i urinen 0,2.

Denne metode eliminerer mulige fejl, der kan opstå ved indsamling af daglig urin.

Kvalitative test oftere end kvantitative tests giver falske positive eller falske negative resultater. Fejl opstår i forbindelse med medicinering, kostvaner, fysisk aktivitet på tærsklen til analysen.

Dekodningen af ​​denne kvalitative test gives ved visuel vurdering af turbiditet i testrøret i sammenligning med testresultatet med kontrollen:

1. svag positiv reaktion estimeres som +;
2. positiv ++;
3. stærkt positiv +++.

Geller-ringtesten vurderer mere præcist forekomsten af ​​protein i urinen, men tillader ikke kvantificering af protein i urinen. Ligesom sulfosalicylsyre-testen giver Geller-testen kun en grov ide om urinproteinindholdet.

Metoden gør det muligt at vurdere proteinuriens grad kvantitativt, men for tidskrævende, unøjagtige, da en stærk fortynding reducerer nøjagtigheden af ​​vurderingen.

For at beregne proteinet skal du multiplicere graden af ​​fortynding af urin med 0, 033 g / l:

Prøven kræver ikke særlige forhold, denne procedure er nem at gøre hjemme. For at gøre dette skal du sænke teststrimlen i urinen i 2 minutter.

Resultaterne vil blive udtrykt ved antallet af plusser på strimlen, hvis dekodning er indeholdt i tabellen:

1. Testresultater svarende til værdier på op til 30 mg / 100 ml svarer til fysiologisk proteinuri.
2. Værdierne på teststrimlerne 1+ og 2 ++ betyder signifikant proteinuri.
3. Værdierne på 3 +++, 4 ++++ er markeret med patologisk proteinuri forårsaget af nyresygdomme.

Teststrimler kan kun ca. bestemme det forøgede protein i urinen. De bruges ikke til nøjagtig diagnostik, og endnu mere kan de ikke sige hvad det betyder.

Tillad ikke teststrimler til tilstrækkeligt at vurdere mængden af ​​protein i urinen hos gravide kvinder. En mere pålidelig metode til vurdering er bestemmelsen af ​​protein i daglig urin.

Bestemmelse af urinprotein ved hjælp af teststrimler:

Dagligt protein i urinen er en mere præcis diagnose af vurderingen af ​​nyrernes funktionelle tilstand. Til dette skal du indsamle al urin udskilles af nyrerne om dagen.

Proteinindholdet i urinen kan findes ved forholdet mellem protein: kreatinin, dataene er vist i tabellen:

Gyldige værdier for protein / kreatininforholdet er dataene i tabellen:

Med tabet på mere end 3,5 g protein pr. Dag kaldes tilstanden massiv proteinuri.

Hvis der er meget protein i urinen, kræves en ny undersøgelse efter 1 måned, derefter efter 3 måneder, ifølge resultaterne, som fastslår, hvorfor normen overskrides.

Årsager til forhøjet protein i urinen er den øgede produktion i kroppen og overtrædelsen af ​​nyrerne, skelne mellem proteinuri:

• fysiologiske - mindre afvigelser fra normen skyldes fysiologiske processer, løses spontant
• patologiske - ændringer skyldes den patologiske proces i nyrerne eller andre organer i kroppen, uden at behandlingen skrider frem.

En lille stigning i protein kan observeres med rigelig proteinernæring, mekaniske forbrændinger, skader ledsaget af øget produktion af immunglobuliner.

En mild proteinuri kan være forårsaget af fysisk anstrengelse, psyko-følelsesmæssig stress eller tage visse lægemidler.

Den fysiologiske proteinuri er en stigning i urinprotein hos børn i de første dage efter fødslen. Men efter en uge af livet betragtes proteinindholdet i barnets urin som en afvigelse fra normen og indikerer en udviklingspatologi.

Nyresygdom, infektionssygdomme er også nogle gange ledsaget af udseendet af protein i urinen.

Sådanne tilstande svarer sædvanligvis til en mild grad af proteinuri, er forbigående fænomener, der hurtigt overføres selv uden at kræve særlig behandling.

Mere alvorlige tilstande er alvorlig proteinuri noteret i tilfælde af:

• glomerulonephritis;
• diabetes;
• hjertesygdom
• blærekræft;
• multiple myelom;
• infektion, lægemiddelskader, polycystisk nyresygdom;
• højt blodtryk
• systemisk lupus erythematosus;
• Goodpasturesyndrom.

Tarmobstruktion, hjertesvigt og hyperthyroidisme kan forårsage spor af protein i urinen.

Varianter af proteinuri klassificeres på flere måder. Til en kvalitativ vurdering af proteiner kan man anvende Yaroshevsky-klassifikationen.

Ifølge systematikken i Yaroshevsky, der blev oprettet i 1971, skelnes proteinuria:

1. renal - som indbefatter overtrædelsen af ​​glomerulær filtrering, frigivelsen af ​​tubulærprotein, manglen på readsorption af proteiner i tubuli;
2. prerenal - forekommer uden for nyrerne, udskillelse af hæmoglobin, proteiner der forekommer i overskud i blodet som følge af multiple myelom;
3. Postrenal - forekommer på urinvejens sted efter nyrerne, udskillelsen af ​​protein i ødelæggelsen af ​​urinorganerne.

For en kvantitativ vurdering af, hvad der sker, er betinget proteinuri grader isoleret. Det skal huskes, at de let kan passere ind i en tungere uden behandling.

Det mest alvorlige stadium af proteinuri udvikler sig med tab af mere end 3 g protein pr. Dag. Tapet af protein fra 30 mg til 300 mg pr. Dag svarer til moderat stadium eller mikroalbumuri. Op til 30 mg protein i daglig urin betyder en mild proteinuri.

Proteinstandard i urin hvor meget?

Normalt protein i urinen er praktisk taget fraværende (mindre end 0,002 g / l). I nogle tilfælde kan der dog forekomme en lille mængde protein i urinen hos raske individer efter indtagelse af en stor mængde proteinfødevarer som følge af afkøling, med følelsesmæssig stress, langvarig fysisk anstrengelse (den såkaldte marcherende proteinuri).

Udseendet af en signifikant mængde protein i urinen (proteinuri) er en patologi. Årsagen til proteinuri kan være nyresygdom (akut og kronisk glomerulonefritis, pyelonefritis, gravid nefropati osv.) Eller urinveje (betændelse i blæren, prostata, urinledere). Renalproteini kan være organisk (glomerulær, tubulær og overskydende) og funktionel (febril proteinuri, ortostatisk hos unge, når overfødte spædbørn, hos nyfødte). Funktionel proteinuri er ikke forbundet med nyresygdom. Den daglige mængde protein varierer hos patienter fra 0,1 til 3,0 g eller mere. Sammensætningen af ​​urinproteiner bestemmes ved elektroforese. Udseendet i urinen af ​​Bens-Jones-protein er karakteristisk for myelom og Waldenstrom-makroglobulinæmi, # 223; 2 mikroglobuliner i tilfælde af skade på nyretubuli.

Normalt protein i urinen er praktisk taget fraværende (mindre end 0,002 g / l).

De vigtigste tegn på sygdom opdaget i undersøgelsen af ​​urin.

SG Specifik vægt. Et fald i den specifikke vægt indikerer et fald i nyrernes evne til at koncentrere urin og udskille toksiner fra kroppen, som det er tilfældet med nyresvigt. Stigningen i specifik vægt er forbundet med en stor mængde sukker i urinen, salte. Det skal bemærkes, at det er umuligt at evaluere tyngdekraften for kun en urintest, der kan forekomme tilfældige ændringer, det er nødvendigt at gentage urinanalysen 1-2 gange.

Proteinprotein i urinen - proteinuri. Årsagen til proteinuri kan være skade på nyrerne selv i nefritis, amyloidose og skade ved giftstoffer. Protein i urinen kan også forekomme på grund af urinvejssygdomme (pyelonefritis, cystitis, prostatitis).

Glukose Glukose (sukker) i urinen - Glykosuri - oftest på grund af diabetes. En sjældnere årsag er nederlaget for nyretubuli. Det er meget foruroligende, hvis ketonlegemer opdages sammen med sukker i urinen. Dette sker med svær, misaligneret diabetes og er en harbinger af de mest alvorlige komplikationer af diabetes - diabetisk koma.

Bilirubin, urobilinogen Bilirubin og urobilin bestemmes i urinen i forskellige former for gulsot.

Erythrocytter Erythrocytter i urinen - hæmaturi. Dette sker enten med nederlag i nyrerne selv, oftest med deres betændelse eller hos patienter med urinvejs sygdomme. Hvis for eksempel en sten bevæger sig langs dem, kan det skade slimhinden, der vil være røde blodlegemer i urinen. En henfaldende nyretumor kan også føre til hæmaturi.

Leukocytter Leukocytter i urinen - leukocyturi, oftest resultatet af inflammatoriske ændringer i urinvejen hos patienter med pyelonefritis, cystitis. Leukocytter bestemmes ofte af betændelse hos de kvindelige ydre kønsorganer hos mænd ved betændelse i prostata.

Cylindrs Cylinders er ejendommelige mikroskopiske strukturer. Hyaline cylindre i en mængde på 1-2 kan være i en sund person. De dannes i nyretubuli, den sidder fast sammen med proteinpartikler. Men stigningen i deres antal, cylindre af andre typer (granulær, erytrocyt, fedt) indikerer altid skaderne af selve nyrerne. Der er cylindre i inflammatoriske sygdomme i nyrerne, metaboliske læsioner, såsom diabetes.

Informativ metode og dens grænser. Informationsindholdet i den generelle urintest for anerkendelse af specifikke sygdomme i nyrerne er lav, kræver normalt yderligere, mere nøjagtige undersøgelser. Men forskning er meget vigtig, især når man gennemfører forebyggende undersøgelser, da det giver mulighed for at identificere tidlige tegn på nyresygdom. Det er også kendt, at ofte nyresygdom opstår skjult, og kun undersøgelsen af ​​urin tillader dem at mistanke og udføre yderligere nødvendig undersøgelse.

I de fleste laboratorier skal du først bruge kvalitative reaktioner, der ikke sporer protein i urinen hos en sund person, når du undersøger urin for protein. Hvis proteinet i urinen påvises ved kvalitative reaktioner, udføres kvantitativ (eller semikvantitativ) bestemmelse. Samtidig er funktionerne i de anvendte metoder, der dækker et andet spektrum af uroproteiner, vigtige. Ved bestemmelse af protein ved anvendelse af 3% sulfosalicylsyre betragtes mængden af ​​protein således som normalt op til 0,03 g / l, under anvendelse af pyrogallolmetoden øges grænsen for normale proteinværdier til 0,1 g / l. I denne henseende er det i analysen form nødvendigt at angive proteinets normale værdi for den metode, som laboratoriet anvender.

Ved bestemmelse af minimale mængder protein anbefales det at gentage analysen. I tvivlstilfælde bør det daglige tab af protein i urinen bestemmes. Normal daglig urin indeholder protein i små mængder. Under fysiologiske forhold er det filtrerede protein næsten helt reabsorberet af epitelet af de proximale tubuli, og dets indhold i den daglige mængde urin varierer ifølge forskellige forfattere fra spor op til 20 50, 80 100 mg og endda op til 150 200 mg. Nogle forfattere mener, at den daglige udskillelse af protein i mængden af ​​30 50 mg / dag er den fysiologiske norm for en voksen. Andre mener, at udskillelsen af ​​urinprotein ikke må overstige 60 mg / m2 kropsoverflade pr. Dag, med undtagelse af den første måned i livet, når værdien af ​​fysiologisk proteinuri kan være fire gange højere end de angivne værdier.

Den generelle betingelse for udseende af proteiner i en sund persons urin er deres ret høje koncentration i blodet og molekylvægten på ikke mere end 100.200 kDa.

Dette er ikke normen, med din diagnose er det muligt, en anden ting er, at det for det nefrotiske syndrom er faktisk en lille indikator. Se på klinikken - hævelse, tryk osv. Fortsæt med at tage den foreskrevne behandling.

og alligevel siger jeg: det er normalt ikke at være!